[發明專利]一種基于熒光dUTP的自動檢測SSR分子標記的方法無效
| 申請號： | 201010239919.8 | 申請日： | 2010-07-28 |
| 公開（公告）號： | CN101899520A | 公開（公告）日： | 2010-12-01 |
| 發明（設計）人： | 甘四明;李發根;翁啟杰;李梅;周長品;于曉麗 | 申請（專利權）人： | 中國林業科學研究院熱帶林業研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 賀紅星 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 熒光 dutp 自動檢測 ssr 分子 標記 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種基于熒光dUTP的自動檢測SSR分子標記的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)配制PCR反應體系：取1.0μL?10×buffer、dNTP?25～50μM、MgCl22.0mM、前向引物0.5μM、后向引物0.5μM、Taq酶1個單位、熒光dUTP?10pmol和基因組DNA?5ng混合，加超純水補至10μL；
(2)進行降落PCR：94℃4min；20個循環：94℃30s、70～60℃或者66℃～56℃30s且每個循環降低0.5℃、72℃1min；再26個循環：94℃30s、60℃或者56℃30s、72℃1min；最后72℃10min，得PCR產物；
(3)取所述PCR產物1.0μL加入9.34μL超純甲酰胺、0.16μL分子量內標，95℃5min后放置冰上快速冷卻，在測序儀上進行標記檢測。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述dNTP為25μM。
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