[發明專利]在酵母中高效表達N-酰基高絲氨酸內酯酶的DNA及其構建的工程菌有效
| 申請號： | 201010239510.6 | 申請日： | 2010-07-27 |
| 公開（公告）號： | CN101914556A | 公開（公告）日： | 2010-12-15 |
| 發明（設計）人： | 周志剛;張宇婷;姚斌;曹雅男;張美超;何夙旭;劉玉春;孟昆 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院飼料研究所 |
| 主分類號： | C12N15/57 | 分類號： | C12N15/57;C12N9/50;C12N15/81;C12N15/63;C12N1/19;C12N5/10;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;任鳳華 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 酵母 高效 表達 ?；?/a> 絲氨酸 內酯 dna 及其 構建 工程 | ||
1.DNA分子，為如下(a)或(b)：
(a)序列表的序列2自5’末端第7至759位核苷酸所示的DNA；
(b)序列表的序列2所示的DNA。
2.含有權利要求1所述DNA分子的重組表達載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。
3.如權利要求2所述的重組表達載體，其特征在于：所述重組表達載體為在pPIC9載體的多克隆位點插入權利要求1所述DNA分子得到的重組質粒。
4.如權利要求3所示的重組表達載體，其特征在于：所示重組表達載體為在pPIC9載體的EcoR?I和Not?I酶切識別位點之間插入權利要求1所述DNA分子得到的重組質粒。
5.如權利要求2所述的重組菌，其特征在于：所述重組菌是在宿主菌中導入權利要求1所述DNA分子得到的重組菌；所述宿主菌為畢赤酵母(Pichia?pastoris)，優選為畢赤酵母(Pichia?pastoris)GS115。
6.如權利要求5所述的重組菌，其特征在于：權利要求1所述DNA分子通過權利要求3或4所述重組表達載體導入所述宿主菌。
7.如權利要求6所述的重組菌，其特征在于：所述重組菌為巴斯德畢赤酵母(Pichia?pastoris)AiiA-B546M，CGMCC?No.3975。
8.權利要求2、5、6或7所述的重組菌在生產N-?；呓z氨酸內酯酶中的應用。
9.一種生產N-?；呓z氨酸內酯酶的方法，是培養權利要求2、5、6或7所述的重組菌，得到N-酰基高絲氨酸內酯酶。
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法中，30℃、250-280rpm培養所述重組菌，培養過程中采用甲醇誘導，所述甲醇在所述培養液中的濃度優選為0.5％(體積百分含量)；所述N-?；呓z氨酸內酯酶的底物為N-3-氧-辛酰高絲氨酸內酯。
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