[發(fā)明專利]群體感應信號分子抑制劑產(chǎn)生菌的鑒別方法及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010236702.1
• 申請日: 2010-07-26
• 公開（公告）號: CN101914607A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發(fā)明（設計）人: 儲衛(wèi)華
• 申請（專利權）人: 儲衛(wèi)華;江蘇星海動物藥業(yè)科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;A23K1/16
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;劉成群

1.一種鑒別產(chǎn)生群體感應信號分子抑制劑的微生物的方法，其特征在于包括下列步驟：

a、將含微生物的樣品用無菌生理鹽水稀釋，取100μl接種于10ml含有500μg/L群體感應信號分子N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯的KG液體培養(yǎng)基中，28-37℃，200rpm搖床培養(yǎng)24h，轉接到相同培養(yǎng)基中，連續(xù)3次后將獲得的增菌液稀釋涂布于LB瓊脂平板上，獲得單個菌落；

b、挑取獲得的單個菌落做一字型接種于LB瓊脂平板中央，28-37℃培養(yǎng)12-24h；

c、將5ml含有10⁶CFU/ml指示菌紫色色桿菌(Chromobacterium?violaceum)ATCC12472或者農(nóng)桿菌(Agrobacterium?tumfaciens)KYC6的45-50℃保溫的0.5％LB瓊脂傾倒于步驟b所獲得的平板上，24-48h培養(yǎng)，在平板中央分離菌周圍未產(chǎn)生紫色或者藍色色素的，說明該菌能產(chǎn)生群體感應信號分子抑制劑。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中步驟a所用KG液體培養(yǎng)基每升含有：氯化鈉1.0g，氯化鉀0.5g，氯化鎂0.4，氯化鈣0.1g，硫酸鈉0.15g，磷酸二氫鉀5.0g，2-嗎啉乙磺酸1.0g，另含1mg氯化鐵，0.1g氯化錳，0.46g氯化鋅以及500μg?C_4-14-HSL，其余為水。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于LB瓊脂平板是在LB液體培養(yǎng)基中加入1.5wt％的瓊脂，LB液體培養(yǎng)基每升含有：胰蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，氯化鈉10.0g，其余為水，pH為7.0-7.5。

4.采用權利要求1所述鑒別方法得到的能產(chǎn)生群體感應信號分子抑制劑的微生物在制備預防人或動物疾病的益生素中的應用。