[發(fā)明專利]一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010236644.2
• 申請日: 2010-07-26
• 公開（公告）號: CN101914564A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐永平;尤建嵩;金禮吉;李曉宇;馬永生;王林會;李化強;吳菲菲
• 申請（專利權(quán)）人: 大連理工大學
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;A61K48/00;A61K39/116;A61P31/04;A61P1/12;A61K39/108
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 梅洪玉

1.一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體，其特征是含有3種不帶信號肽序列的成熟基因：不耐熱腸毒素LT、耐熱腸毒素STa及STb，其融合的順序是LT居中，STa和STb在兩側(cè)，此多價融合基因是“5’-STa-LT-STb-3’”或“5’-STb-LT-STa-3’”。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體，其特征在于：不耐熱腸毒素LT是指不耐熱腸毒素LT的B亞基LTB、LTB的突變體、含有LTB抗原決定簇的基因片段或LTB的類似物霍亂毒素B亞基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體，其特征在于：STa、LT和STb任意兩個融合基因之間由超過15個核苷酸長度的連接序列連接。

4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體，其特征在于：3種腸毒素基因LT、STa或STb是其正常基因、突變基因、基因的片段、多個基因的串聯(lián)體或多個基因片段的串聯(lián)體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體，其特征在于：在其5’端加上信號肽序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體，其特征在于：所述的信號肽序列是指雞的胰島素的信號肽，其序列長度為72個堿基，其序列為

ATGGCTCTCTGGATCCGATCACTGCCTCTTCTGGCTCTCCTTGTCTTTTC

TGGCCCTGGAACCAGCTATGCA。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體，其特征在于：所述的信號肽序列是指雞的尿激酶型纖溶酶原激活物(upa)的信號肽，其序列長度為60個堿基，其序列為

ATGAAGTTAATCATCTTTCTCACAGTAACTCTCTGCACACTTGTCACAG

GACTTGATTCT。

8.應(yīng)用權(quán)利要求1或5所述的一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體，其特征在于：將它克隆至適當?shù)恼婧吮磉_載體中，制成核酸疫苗，免疫動物用于防治產(chǎn)腸毒素大腸桿菌引起的腹瀉。

9.一種產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的多價融合腸毒素蛋白，其由權(quán)利要求1所述的一種大腸桿菌多個腸毒素基因的融合體在適當?shù)乃拗骷毎麅?nèi)表達產(chǎn)生。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的多價融合腸毒素蛋白，其特征在于：單獨作為疫苗使用，或者作為一個組分被加入其他多價或多聯(lián)疫苗中，免疫動物或人防治由產(chǎn)腸毒素大腸桿菌引起的腹瀉。