[發(fā)明專利]一種高純度片狀蟲草素晶體的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010235132.4
• 申請日: 2010-07-23
• 公開（公告）號: CN101928316A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發(fā)明（設計）人: 唐永范;唐亮
• 申請（專利權）人: 上海國寶企業(yè)發(fā)展中心;上海國寶生物工程研究所
• 主分類號: C07H19/16
• 分類號: C07H19/16;C07H1/08
• 代理公司: 上海集信知識產權代理有限公司 31254
• 代理人: 魏學成

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技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥化工領域，具體為一種高純度片狀蟲草素晶體的制備方法，尤其是從北冬蟲夏草培養(yǎng)基殘基中提取高純度片狀蟲草素晶體的方法。

背景技術

北冬蟲夏草（北蟲草），又名蛹蟲草(Cordyceps?militaris)，屬子囊菌亞門、麥角菌科、蟲草屬，是一種珍貴的藥用菌。近年來，由于天然冬蟲夏草(Cordyceps?sinensis)需求不斷增長，有限的資源日益枯竭，目前尚未人工規(guī)?；耘?。于是人們開始培育生產周期短，與天然冬蟲夏草有相似醫(yī)療保健功效的北冬蟲夏草滿足消費需求，替代天然冬蟲夏草的不足，為人工規(guī)?；嘤谋倍x夏草的發(fā)展提供了廣闊的市場和良好的發(fā)展機遇。

人工培育的北冬蟲夏草培養(yǎng)基中含有蟲草素、蟲草多糖等生理活性成份，從殘余培養(yǎng)基中提取蟲草素、蟲草多糖等保健食品或醫(yī)藥中間體，將能變廢為寶，提高企業(yè)經濟效益。

蟲草素是天然冬蟲夏草、人工培育北冬蟲夏草中重要的生理活性成份。蟲草素（cordycepin）是由腺嘌呤和脫氧戊糖組成，也稱3′-脫氧腺苷(3′-deoxyadenosine)。

大量的藥理學試驗結果表明，蟲草素具有抗腫瘤、抗菌抗病毒、免疫調節(jié)、清除自由基、減肥、提高性功能等作用，表現出良好的臨床應用前景。目前高含量的蟲草素市場價格昂貴，因此，制備高純度的蟲草素具有重要的經濟價值和廣闊的市場前景。

據國內外所有公開報道的蟲草素分離純化專利文獻，未從報道過高純度片狀蟲草素晶體的制備方法。報道過的專利文獻中，蟲草素的分離純化工藝比較復雜，需經過不同的樹脂處理或須借助昂貴的高效液相制備色譜技術設備，生產成本高，難于實現規(guī)模化工業(yè)生產。

發(fā)明內容

本發(fā)明旨在提供一種高純度片狀蟲草素晶體的制備方法，從北冬蟲夏草培養(yǎng)基殘基提取高純度片狀蟲草素晶體。

一種高純度片狀蟲草素晶體的制備方法，是利用提取劑對北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基中的蟲草素進行提取，同時使提取液流經大孔樹脂后再次對北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基進行循環(huán)提取和吸附；再將吸附在大孔樹脂上的蟲草素洗脫下來，洗脫液濃縮、結晶和再結晶后得到高純度片狀蟲草素晶體。

具體步驟包括：

（1）?將北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基粉碎后置于容器內，用提取劑對北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基進行提??；提取劑流出后用大孔樹脂進行吸附，然后流回裝有北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基的容器循環(huán)提取；提取時間為10～20hr；

北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基、提取劑和大孔樹脂的用量比為1kg：1～20L：0.3～0.5L，優(yōu)選為1kg：2～10L：0.3～0.5L；提取劑為水；

（2）?用洗脫劑洗脫大孔樹脂，得到洗脫液；洗脫速度為0.5～2BV/hr；

北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基與洗脫劑的用量比為1kg：1～2L；

洗脫劑為10～50%體積濃度的乙醇水溶液；

（3）?取洗脫液濃縮和結晶，分離固體得到蟲草素粗品；

（4）?將蟲草素粗品洗滌和重結晶，得到高純度片狀蟲草素晶體。

步驟（1）中，將粉碎的北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基過10～20mm篩。

步驟（1）中，裝有北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基的容器上部出水口連接到裝有大孔樹脂的吸附柱的底部入水口，吸附柱上部出水口接到流到裝有北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基殘基的容器底部的入水口，提取液的流動方向為：容器底部入水口——容器上部出水口——吸附柱底部入水口——吸附柱上部出水口——容器底部入水口。

步驟（1）中，所用的大孔樹脂為非極性大孔樹脂；可選用H-20型、H-01型或H-10型大孔樹脂，優(yōu)選為H-20型大孔樹脂。

步驟（3）中先將洗脫液濃縮至比重為1.05～1.1，再在0～30℃下結晶，優(yōu)選的結晶溫度為0～4℃。

步驟（3）中，用離心或真空抽濾的方法分離固體。

步驟（4）中，用75%～99%體積濃度的乙醇水溶液為溶劑進行重結晶。

將步驟（4）重結晶得到的產品洗滌干燥，用75%～99%體積濃度的乙醇水溶液洗滌，80～100℃下加熱烘干，或-50～-10℃下低溫冷凍干燥。

本發(fā)明的方法，采用大孔吸附樹脂作為分離介質，以水、乙醇做為溶劑，在常溫下連續(xù)動態(tài)地進行提取和吸附分離，實現從北冬蟲夏草培養(yǎng)基中分離制備出高純度片狀蟲草素晶體，變廢為寶；克服現有蟲草素提取、分離純化技術的不足，工藝簡單，實現連續(xù)提取、分離，所用樹脂不需經過酸堿再生可以重復使用，設備投資和生產運行成本低，環(huán)保，片狀蟲草素晶體HPLC純度99.9％以上，適合大規(guī)模工業(yè)化生產。

附圖說明