[發明專利]一種脂籠蛋白的高效表達、復性、純化方法

無效

• 申請號: 201010234695.1
• 申請日: 2010-07-23
• 公開（公告）號: CN102336820A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 林勝祥;陳澤庸;鄒永水
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K1/14;C12N15/11;C12N15/70
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種制備可溶性脂籠蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)將脂籠蛋白的包涵體進行變性，分離含有經變性的脂籠蛋白的上清；

(2)調節所獲得的上清的PH值至5-6，用聚合度為200-1000的PEG和C2-C8的多羥基醇進行復性，獲得可溶性脂籠蛋白。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的包涵體如下表達：

(a)將含有脂籠蛋白編碼基因的表達載體轉化大腸桿菌，培養該大腸桿菌；

(b)用IPTG誘導大腸桿菌，使之表達脂籠蛋白的包涵體。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，還包括：破碎大腸桿菌細胞，分離獲取沉淀，其中含有脂籠蛋白的包涵體。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，采用Tirs-HCl、NaCl和甘油破碎。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，還包括：對獲得的沉淀進行洗滌，去除部分雜質。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的洗滌包括步驟：用尿素懸浮沉淀，勻漿，超聲波粉碎后離心棄上清。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，采用5±1mol/L鹽酸胍溶液對脂籠蛋白的包涵體進行變性。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的脂籠蛋白的N端含有His-TAG，且步驟(1)和步驟(2)之間還包括步驟：調節步驟(1)獲得的上清的PH值至8.0±0.5，用鎳柱純化，獲得經純化的上清。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，采用透析的方法進行復性，以含有PEG和多羥基醇的水溶液作為透析液；透析后離心獲取上清。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的PEG濃度按照體積比為10±2％；或

所述的多羥基醇的濃度按照體積比為10±2％。