[發明專利]中藥石蒜提取物中加蘭他敏的毛細管電泳電化學發光檢測方法

無效

• 申請號: 201010234680.5
• 申請日: 2010-07-23
• 公開（公告）號: CN102335297A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 高英;向前;孟祥萍;龍北生;高嬿;馬戈;唐娟;韓冰雁
• 申請（專利權）人: 長春工程學院;中國科學院長春應用化學研究所
• 主分類號: A61K36/88
• 分類號: A61K36/88;G01N27/447;G01N21/76;A61P25/16;A61K125/00
• 代理公司: 長春科宇專利代理有限責任公司 22001
• 代理人: 馬守忠

技術領域

本發明屬于毛細管電泳電化學發光檢測技術領域，具體涉及毛細管電泳電化學發光檢測中藥石蒜提取物中加蘭他敏的方法。

背景技術

中藥與先進的檢測技術相融合，可以為提高中藥在國際市場的競爭力，擴大中藥在國際市場的份額，起到積極的促進作用。石蒜是一種傳統的中藥，石蒜中的生物堿有著重要的藥用價值，如石蒜中的加蘭他敏可用于制備治療帕金森等病癥的藥物。人們一直在研究探索石蒜中活性成分檢測的新方法，對石蒜提取物中加蘭他敏的高效分離、靈敏檢測是化學分析領域的一個重要研究內容。

目前加蘭他敏的分析方法主要有氣相色譜質譜聯用技術[1.2]、高效液相色譜法等[3-5]，最近毛細管電泳技術也被用于加蘭他敏的分析嘗試[6]。作為中藥產品常見的質量控制方法，石蒜中加蘭他敏的分析往往采用傳統的高效液相色譜質譜聯用技術。這種技術具有靈敏度高同時還能提供被分析物結構信息的優勢。但是高效液相色譜-質譜儀設備昂貴、操作復雜，有機試劑的使用等均構成了該技術難以推廣使用的技術物質障礙。

毛細管電泳是經典電泳和現代微柱分離技術相結合的產物，是一種以電滲為驅動力依據各待測組分質核比進行分離的高效液相微分離技術，適用于各種帶電離子以及中性物質的分析。毛細管電泳方法具有樣品試劑用量小，高效快捷，儀器簡單等優勢，近年來，毛細管電泳與各種檢測技術連用，顯示了強大的分析能力。分析對象從無機離子、有機離子、藥物，到生命科學的DNA，蛋白質，多肽，核苷酸，氨基酸等生物分子。目前該技術在分析化學、生物分析化學等領域得到了廣泛的應用。吡啶釕電化學發光是一種靈敏的檢測技術，其原理是通過電化學方法在電極表面產生一些特殊的物質。這些物質之間或與體系中其它組分之間通過電子傳遞形成激發態，激發態返回到基態產生發光現象，產生的發光強度正比于被分析物濃度，從而被分析物得到檢測。該方法本身無需其它額外的光源，避免了背景光源的干擾，具有選擇性好，光子產率高，電化學發光反應循環可逆等特點，是一種靈敏經濟的檢測手段。由于吡啶釕的水溶性好，因此可與毛細管電泳體系高度兼容。毛細管電泳與吡啶釕電化學發光技術相聯用，將毛細管電泳的高效分離與吡啶釕的電化學發光的靈敏檢測等優勢有機結合，可以為低濃度、介質復雜待測樣品的分析提供科學合理的技術平臺。(參考文獻[1]R.Gotti，J.Fiori，M.Bartolini?and?V.Cavrini，J.Pharm.Biomed.Anal.42(2006)17.[2]S.Berkov，J.Bastida，F.Viladomat?and?C.Codina，Phytochem.Anal.，19(2008)285.[3]T.Verhaeghe，L.Diels，R.deVries，M.De?Meulder?and?J.de?Jong，J.Chromatogr.B，789(2003)337.[4]K.Ingkaninan，C.M.de?Best，R.van?der?Heijden，A.J.P.Hofte，B.Karabatak，H.Irth，U.R.Tjaden，J.vander?Greef?and?R.Verpoorte，J.Chromatogr.A，872(2000)61.[5]J.Maláková，M.Nobilis，Z.Svoboda，M.Lísa，M.J.Květina，J.and?V.J.Chromatogr.B?853(2007)265.[6]Y.-H.Hsieh，Y.-H.Yang，H.-H.Yeh，P.-C.Lin?and?S.-H.Chen，Electrophoresis?30(2009)644.)

發明內容

本發明的目的是提供中藥石蒜提取物中加蘭他敏的毛細管電泳電化學發光檢測方法。該方法是一種靈敏、簡單、快速的毛細管電泳電化學發光檢測石蒜提取物中加蘭他敏的方法。

中藥石蒜提取物中加蘭他敏的毛細管電泳電化學發光檢測方法的步驟和條件如下：

1.1待檢品的制備

1.1.1加蘭他敏標準溶液的制備

把加蘭他敏標準品溶解于二次水中，制得加蘭他敏標準品儲備液，所述的儲備液的濃度為為5.0mmol/L，儲備液在4℃冰箱中冷藏保存；

用二次水將加蘭他敏標準品儲備液稀釋成濃度為2.0×10^-5mol/L的加蘭他敏標準溶液；

1.1.2石蒜提取物相關溶液的制備

A.石蒜提取物溶液的制備