[發(fā)明專利]中藥石蒜提取物中加蘭他敏的毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010234680.5
• 申請(qǐng)日: 2010-07-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102335297A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高英;向前;孟祥萍;龍北生;高嬿;馬戈;唐娟;韓冰雁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)春工程學(xué)院;中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所
• 主分類號(hào): A61K36/88
• 分類號(hào): A61K36/88;G01N27/447;G01N21/76;A61P25/16;A61K125/00
• 代理公司: 長(zhǎng)春科宇專利代理有限責(zé)任公司 22001
• 代理人: 馬守忠

1.中藥石蒜提取物中加蘭他敏的毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于步驟和條件如下：

1.1待檢品的制備

1.1.1加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

把加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)品溶解于二次水中，制得加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，所述的儲(chǔ)備液的濃度為為5.0mmol/L，儲(chǔ)備液在4℃冰箱中冷藏保存；

用二次水將加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液稀釋成濃度為2.0×10^-5mol/L的加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)溶液；

1.1.2石蒜提取物相關(guān)溶液的制備

A.石蒜提取物溶液的制備

將石蒜研磨成粉末，過(guò)40目篩；稱取0.5g中藥石蒜粉末，加入25mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85％的乙醇，40℃條件下在超聲池中超聲10min，然后再用索式提取器萃取2小時(shí)，收集石蒜提取物溶液；石蒜提取物溶液用0.2μL濃度為12mol/L的鹽酸中和后，用0.45μm的濾膜過(guò)濾，得到純凈的石蒜提取物溶液；

B.石蒜提取物稀釋溶液的制備

由步驟A得到的石蒜提取物溶液用二次水稀釋，獲得石蒜提取物稀釋溶液，加入二次水的體積是步驟A乙醇體積的5倍；

C.石蒜提取物稀釋加標(biāo)溶液的制備

向步驟A得到的石蒜提取物溶液中加入由步驟1.1.1獲得的濃度為2.0×10^-5mol/L的加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二次水稀釋獲得石蒜提取物稀釋加標(biāo)溶液，加入二次水的體積是步驟A乙醇體積的5倍；

1.2檢測(cè)步驟和條件

1.2.1儀器裝置

內(nèi)徑50μm未涂層融硅毛細(xì)管；直徑500μm鉑盤(pán)工作電極；Ag/AgCl飽和參比電極；Pt絲對(duì)極；電化學(xué)發(fā)光綜合分析儀，西安瑞邁分析儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)；

1.2.2試劑

加蘭他敏的標(biāo)準(zhǔn)品，二次水；三聯(lián)吡啶釕的六水合氯化物(Ru(bpy)₃Cl₂.6H₂O)，NaH₂PO₄，Na₂HPO₄，NaOH，鹽酸，乙醇，所用試劑均為分析純；

1.2.3溶液的制備

所有配制好的溶液在使用之前均經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾；

1.2.3.1背景電解質(zhì)溶液的配制

①磷酸鹽緩沖溶液的配制

配制濃度為200.0mmol/L的NaH₂PO₄和濃度為200.0mmol/L的Na₂HPO₄，將同濃度的二者混合再用二次水稀釋配成濃度為100.0mmol/L的磷酸鹽緩沖溶液，調(diào)整磷酸鹽緩沖溶液pH值為7.50；

②Ru(bpy)₃²⁺溶液的配制

用二次水配制20.0mmol/L?Ru(bpy)₃²⁺溶液；

③背景電解質(zhì)溶液的配制

將步驟①制備的磷酸鹽緩沖溶液與步驟②制備的Ru(bpy)₃²⁺溶液混合，用二次水稀釋配制背景電解質(zhì)溶液；背景電解質(zhì)溶液中磷酸鹽濃度為50.0mmol/L，Ru(bpy)₃²⁺濃度為5.0mmol/L；

1.2.3.2運(yùn)行緩沖溶液的配制

配制濃度為200.0mmol/L的NaH₂PO₄和濃度為200.0mmol/L的Na₂HPO₄，將同濃度的二者混合，再用二次水稀釋配成濃度為15.0mmol/L的運(yùn)行緩沖溶液，調(diào)整運(yùn)行緩沖溶液pH值為8.49；

1.2.4檢測(cè)步驟

1.2.4.1分離毛細(xì)管的處理

為了保證加蘭他敏高效分離，靈敏檢測(cè)及分析結(jié)果的重現(xiàn)性，需對(duì)毛細(xì)管做以下處理：

新的毛細(xì)管柱用0.1mol/L濃度的氫氧化鈉沖滿過(guò)夜，使用前用0.1mol/L氫氧化鈉活化10min，用二次水沖洗10min，然后用由步驟1.2.3.2獲得的運(yùn)行緩沖溶液平衡10min；

1.2.4.2中藥石蒜提取物的毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)

將步驟1.1.2中的步驟B得到的石蒜提取物稀釋溶液和步驟1.1.2中的步驟C得到的石蒜提取物稀釋加標(biāo)溶液分別按下述條件進(jìn)行檢測(cè)：

檢測(cè)電位1.20V；進(jìn)樣時(shí)間10s；進(jìn)樣高壓10kV；電泳分離高壓13kV；檢測(cè)池中添加步驟1.2.3.1制備的背景電解質(zhì)溶液；電泳采用步驟1.2.3.2獲得的運(yùn)行緩沖溶液；

采用1.2.1儀器裝置：內(nèi)徑50μm未涂層融硅毛細(xì)管；直徑500μm鉑盤(pán)工作電極；Ag/AgCl飽和參比電極；Pt絲對(duì)極；電化學(xué)發(fā)光綜合分析儀，西安瑞邁分析儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)；電化學(xué)發(fā)光采用柱端檢測(cè)模式；光電倍增管偏置電壓設(shè)定在800V；獲得中藥石蒜檢測(cè)的電泳圖譜。