[發明專利]一種發酵液中蘇氨酸含量的快速測定方法

有效

• 申請號: 201010234629.4
• 申請日: 2010-07-23
• 公開（公告）號: CN101923066A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 姜守剛;郭英熙;王均成;喬連生;徐國華;劉元濤;張春宇
• 申請（專利權）人: 山東阜豐生物科技開發有限公司
• 主分類號: G01N27/42
• 分類號: G01N27/42
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域??本發明屬于蘇氨酸檢測技術領域，具體涉及一種發酵液中蘇氨酸含量的快速測定方法。

背景技術??蘇氨酸發酵液中主要含有一定量的酸和糖，另外還含有一些金屬離子、維生素、和微量元素等，現在測量發酵液中蘇氨酸含量的主要方法為紙層析法、氨基酸分析儀法等。紙層析法是行業內最常用的測定發酵液中蘇氨酸含量的方法，但該方法存在檢測時間長的缺點，從而不能迅速出具數據為發酵生產起指導作用。氨基酸分析儀法測定結果比較準確，但缺點是費用較高。

測定蘇氨酸含量的方法還有高氯酸電位滴定法，此法是在非水介質(如冰乙酸)中，用高氯酸作滴定劑，結晶紫為指示劑準確滴定蘇氨酸，產物為蘇氨酸的高氯酸鹽，呈酸性。結晶紫在強酸介質中為綠色，pH2左右為藍色，pH＞3時為紫色，可以指示此反應的滴定終點。因此，高氯酸電位滴定法只能用于非水滴定測定蘇氨酸，局限于測定固體樣品，不能測定發酵液中蘇氨酸的含量。

發明內容??本發明的目的是解決現有技術存在檢測時間長、費用高和有局限性的技術問題，提供一種發酵液中蘇氨酸含量的快速測定方法，此方法不僅費用低廉，而且能夠為蘇氨酸實際生產快速準確地提供所要求的檢測數據。

本發明發酵液中蘇氨酸含量的快速測定方法，按照以下步驟操作：

1)、0.1mol/L高氯酸的冰醋酸溶液配制：在500ml的容量瓶中加入100ml冰醋酸，移取4.5ml高氯酸于容量瓶中，然后加入5ml醋酸酐，搖勻，用冰醋酸定容至500ml，靜置過夜；

2)、自動電位滴定儀標定：精確稱量0.15-0.2g已于105-110℃下干燥2h的基準試劑鄰苯二甲酸氫鉀，放入100ml燒杯中，用25ml的冰醋酸微熱溶解，用配制好的0.1mol/L高氯酸的冰醋酸溶液電位標定，按下式計算：

F=1000mM(V1-V2)]]>

式中：V₁---0.1mol/L高氯酸的冰醋酸溶液滴定樣品用的體積數，ml

V₂---0.1mol/L高氯酸的冰醋酸溶液滴定空白用的體積數，ml

m---鄰苯二甲酸氫鉀的質量，g

M----鄰苯二甲酸氫鉀的相對分子質量，204.21

F----0.1mol/L高氯酸的冰醋酸溶液的標定值

3)、采用高氯酸電位滴定法測定蘇氨酸和還原糖總含量：將蘇氨酸發酵液在8000～10000r/min的轉速下高速離心5～10min后，取1ml離心后的上清液注入燒杯中，然后再加入5ml醋酸酐、50ml冰乙酸，小心的將電極插入到燒杯中的液體中，啟動攪拌裝置，攪拌均勻后，按電位滴定儀面板上的樣品鍵，選擇測定蘇氨酸的方法，輸入樣品體積，啟動測定鍵，反應開始，樣品自動測定，測定完成后，自動打印測定結果，測量完畢后先關閉攪拌，取出電極并及時將電極清洗，用干凈的濾紙擦干放入無水甲醇氯化鉀保護液中；

4)、采用斐林試劑法測定還原糖含量：準確吸取步驟3)中離心后的上清液5ml，用蒸餾水稀釋定容至100ml待用，準確移取斐林甲、乙液各5ml于三角瓶內，混勻，吸取0.5ml上清液的稀釋液注入此三角瓶中，混勻后，將此三角瓶放在電爐上，加入適量的0.1g/dl標準葡萄糖液，加熱至沸騰，立即以每3秒1-2滴的速度繼續用0.1g/dl標準葡萄糖液滴定三角瓶中的溶液，直至藍色剛好消失，此滴定操作需在1min內完成，在同樣條件下以蒸餾水代替離心后的上清液做空白對照試驗，按下式計算還原糖的含量：