[發(fā)明專利]土壤中土霉素殘留量的高效液相色譜檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010233681.8
• 申請日: 2010-07-22
• 公開（公告）號: CN101900711A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李兆君;范菲菲;梁永超
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京君尚知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11200
• 代理人: 余功勛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)物質(zhì)殘留量檢測技術(shù)，尤其涉及土壤中土霉素殘留量的高效液相色譜檢測方法。

背景技術(shù)

近年來，隨著集約化畜牧業(yè)以及配合飼料工業(yè)的發(fā)展，四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、青霉素類、氨基糖類和磺胺/甲氧芐氨嘧啶類抗生素作為飼料添加劑越來越被廣泛地應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中。據(jù)統(tǒng)計(jì)，歐共體每年養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的消耗量已達(dá)5000多噸；美國每年動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的用量約為11,000多噸，約占抗生素總用量的70％左右；我國抗生素用量約為美國的600倍左右。在所使用的抗生素中，土霉素(Oxytetracycline，OTC)和四環(huán)素(Tetracycline)等四環(huán)素類抗生素是應(yīng)用最廣泛、使用量最大的一類抗生素。我國畜禽糞便土霉素含量平均為9.09mg/kg。另據(jù)報(bào)道，我國農(nóng)村每年畜禽糞便產(chǎn)生量約達(dá)40億噸，80％以上的畜禽糞便沒有經(jīng)過綜合處理，而直接被施于農(nóng)田，經(jīng)動(dòng)物糞便排出的各種抗生素及其代謝產(chǎn)物極易進(jìn)入農(nóng)田土壤環(huán)境中，導(dǎo)致各種抗生素尤其是土霉素等四環(huán)素類抗生素在土壤環(huán)境中的累積，從而降低土壤生物活性，進(jìn)而減弱土壤的生物功能。因此，急需建立一種適合于檢測土壤中土霉素等四環(huán)素類抗生素殘留的方法，以探明和摸清我國農(nóng)田土壤中四環(huán)素類抗生素的殘留及轉(zhuǎn)化，從而實(shí)現(xiàn)我國農(nóng)產(chǎn)品安全和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。然而，目前關(guān)于介質(zhì)中土霉素等抗生素殘留的測定方法大多是基于畜禽蛋肉、乳制品、動(dòng)物組織、水產(chǎn)品、飼料和蜂膠等介質(zhì)中四環(huán)素類抗生素中的提取及測定建立起來的，如豬肉中四環(huán)素類藥物殘留的測定方法(王立君，趙健，楊挺.固相萃取一高效液相色譜法測定豬肉中四環(huán)素類藥物的殘留[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2006(11)：120-121)；肉類及水產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留量的測定方法(許傳梅，星玉秀，董琦，皮立，肖遠(yuǎn)，胡鳳祖.肉類及水產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留量的高效液相色譜測定方法[J].分析實(shí)驗(yàn)室，2007，12(26)：258-260)；飼料中土霉素的測定方法(宋慧敏，耿士偉，馮三令，儲瑞武，馮群科，賈書靜.高效液相色譜法測定飼料中土霉素[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù)，2008，10(S2)：43-47)；畜、禽肉中土霉素殘留量的測定方法(修麗華，姜世娟，遲惠，宋永健，郭偉偉，王娟.高效液相色譜法測定畜、禽肉中土霉素的殘留量[J].現(xiàn)代食品科技，2007，11(23)：88-90)；雞肝中土霉素、金霉素、四環(huán)素的測定方法(喬坤云.HPLC分析測定雞肝中土霉素、金霉素、四環(huán)素方法[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2003，10(13)：610-611)；簡單流動(dòng)相測定土霉素含量的方法(徐春明，鄭廣軍.簡單流動(dòng)相測定土霉素的含量[J].工程科學(xué)，2008，01(10)：25-30)；雞肉中5種四環(huán)素類藥物殘留量的測定方法(余永新，王靜，曹維強(qiáng).RP-HPLC法快速檢測雞肉中5種四環(huán)素類藥物殘留量[J].毒理學(xué)雜志，2007，12(21)：495-497)；城市污水中氯霉素和四環(huán)素類抗生素的測定方法(劉虹，張國平，劉叢強(qiáng).貴陽城市污水及南明河中氯霉素和四環(huán)素類抗生素的特征[J].分析化學(xué)，2007，35(3)：315-319)；畜牧糞便中13種抗生素藥物殘留的測定方法(胡獻(xiàn)剛，羅義，周啟星，徐琳.固相萃取-高效液相色譜法測定畜牧糞便中13種抗生素藥物殘留[J].分析化學(xué)，2008，36(9)：1162～1166)。鮮見關(guān)于土壤中四環(huán)素類抗生素殘留的提取及測定方法的報(bào)道。我國土壤種類繁多，其性質(zhì)和畜禽蛋肉等農(nóng)產(chǎn)品具有較大的差異，因此，難以將上述介質(zhì)中土霉素等四環(huán)素類抗生素的測定方法直接應(yīng)用于土壤中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中無法快速、準(zhǔn)確檢測土壤中土霉素的缺陷，提供一種土壤中土霉素提取且測定殘留量的方法，以期為探明土霉素在農(nóng)田土壤中的殘留及其轉(zhuǎn)化提供方法依據(jù)。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：土壤中土霉素殘留量的高效液相色譜檢測方法，包括如下步驟：

(1)配制土霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和提取緩沖液Na₂EDTA-Mcllvaine；

(2)提取土壤樣品中的土霉素：在干燥土壤樣品中加入提取緩沖液Na₂EDTA-Mcllvaine，混合均勻，提取、離心獲得的上清液即為土霉素待測液；

(3)對土霉素待測液進(jìn)行純化和洗脫獲得洗脫液；

(4)洗脫液干燥后加入流動(dòng)相，提取過濾得濾液；

(5)用高效液相色譜法測定濾液中的土霉素含量。

土霉素的提取方式為超聲提取。

每次超聲提取的時(shí)間為3-20分鐘。最優(yōu)為8分鐘。