[發明專利]幽門螺桿菌胸苷酸合成酶ThyX的晶體及制備方法

無效

• 申請號: 201010230809.5
• 申請日: 2010-07-21
• 公開（公告）號: CN101892203A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 鄒全明;張曉麗;章金勇;郭鷹;石云;毛旭虎;郭剛
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/63
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

1.一種幽門螺桿菌的胸苷酸合成酶ThyX的晶體，其特征在于：所述晶體結構具有a＝222.15，b＝49.26，c＝142.49；α＝90°，β＝98.65°，γ＝90°晶胞元，所述晶體的蛋白空間群為C2。

2.權利要求1所述的幽門螺桿菌的胸苷酸合成酶ThyX的蛋白，其序列特征為具有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。

3.權利要求1所述的幽門螺桿菌的胸苷酸合成酶ThyX晶體的生物學活性單位，其特征在于：所述活性單位的每個ThyX由四個ThyX單體分子組成的四體，每個四體中有四對底物dUMP和輔因子FAD分子，每一對底物dUMP和輔因子FAD的結合口袋以及附近的氨基酸共同組成酶催化活性中心。

4.根據權利要求3所述的活性單位，其特征在于：所述活性中心附近的氨基酸包括Arg70、His71、Tyr110、Asn166、Asp167和Lys201。

5.根據權利要求3所述的活性單位，其特征在于：所述底物dUMP由來自于β3折疊固定，每個FAD由來自于四體中的三個亞基上的氨基酸與其形成的氫鍵共同參與對其固定作用。

6.根據權利要求5所述的活性單位，其特征在于：所述ThyX蛋白的中參與FAD結合的氨基酸包括Arg70、His71、Ser73、Glu76、Arg97、Val105、Tyr110，Arg188、Asn192和Leu196，ThyX蛋白的中參與dUMP結合的氨基酸包括Arg89、Glu94、Arg97、Ser107、Ser108、Arg109、Lys170和Arg197。

7.權利要求1所述的ThyX的晶體的制備方法，其特征在于有以下步驟：

1)將幽門螺桿菌26599基因組中的thyX基因克隆至表達載體pET-30a中，得到pET30a-ThyX重組質粒，重組質粒經轉化、表達、誘導、純化，得到純度和均一度高的蛋白ThyX；

2)步驟1)所得蛋白進行懸滴氣象擴散法進行結晶；

3)用旋進法收集X射線衍射數據，處理收集得到的衍射數據，用MolecularReplacement的分子置換方法，得到ThyX的晶體。