[發明專利]臨床用N-CIK細胞培養、質量控制鑒定試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201010230547.2
• 申請日: 2010-07-19
• 公開（公告）號: CN101914497A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 徐峰波
• 申請（專利權）人: 濟南迪博生物技術有限公司;徐峰波
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N5/0783;G01N33/53;G01N21/64;C12Q1/02;A61K35/14;A61P35/00
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1.一種臨床用單個核細胞的分離、N-CIK細胞(NK和CIK細胞)的誘導、培養以及產品質量控制鑒定的試劑盒體系，其特征在于，系統設計了臨床用N-CIK細胞的獲得及其產品質量控制鑒定的一整套完整的試劑盒體系，使應用更簡潔高效；其特征還在于，包含分離試劑盒、鑒定試劑盒、誘導培養試劑盒。

2.一種外周血單個核細胞的分離試劑盒，其特征在于，包含一次性使用的200mL肝素抗凝采血袋(帶采血專用針)1個、內裝150mL～240mL醫用0.9％生理鹽水的300mL密封潔凈混合瓶和內裝10mL～15mL淋巴分離液的50mL潔凈離心管，25mL移液管；其特征還包括，所述試劑耗材在符合GMP標準條件下包裝于特殊容器中。

3.一種外周血單個核細胞的鑒定試劑盒，其特征在于，它包含四組雙色抗體組合物，分別是P-1：FITC-IgG/PE-IgG，P-2：FITC-CD3/PE-CD4，P-3：FITC-CD14/PE-CD19；其制備特征在于每兩種抗體按照體積比1∶1混合并裝于1支專用棕色管中，以用于外周血單個核細胞的熒光鑒定；

根據權利要求2、3所述的試劑盒，其特征在于，外周血單個核細胞分離試劑盒和外周血單個核細胞鑒定試劑盒可以獲得N-CIK誘導培養的前體細胞。

4.一種臨床用N-CIK細胞無血清液態完全培養基，其特征在于，它含有人體細胞生長必需的碳水化合物、氮源、維他命、礦物質和水，并添加1～2％體積比的細胞培養添加劑，包括非必須氨基酸、丙酮酸鈉、青霉素鈉以及硫酸鏈霉素。

5.一種N-CIK細胞誘導因子組合物NC-1，其特征在于，它含有人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、人干擾素γ和RPMI?1640，且人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、人干擾素γ的質量體積濃度分別為：0.5～1mg/L和20～80mg/L；

如權利要求5所述的組合物NC-1，其特征還包括其應在N-CIK細胞誘導第1天，按照體積比1∶1000加入到細胞濃度為1×10⁶個單個核細胞/mL的臨床用N-CIK細胞無血清液態完全培養基中，培養10～24小時。

6.一種N-CIK細胞誘導因子組合物NC-2，其特征在于，它含有人白介素1、人白介素2、抗CD3膜單抗和RPMI?1640，且人白介素1、人白介素2、抗CD3膜單抗的質量體積濃度分別為：5～50mg/L、1～50wU/L和5～30mg/L；

如權利要求6所述的組合物NC-2，其特征還包括其應在N-CIK誘導第2天和第4天，按照體積比1∶1000或者0.5∶1000加入到細胞濃度為1×10⁶個單個核細胞/mL的臨床用N-CIK細胞無血清液態完全培養基中。

7.一種N-CIK細胞誘導因子組合物NC-3，其特征在于，它含有人白介素2、植物凝集素和RPMI?1640，且人白介素2和植物凝集素的質量體積濃度分別為：5-25wU/L和0.5-3g/L。如權利要求7所述的組合物NC-3，其特征在于，應在N-CIK培養擴增添液或者分瓶中，將誘導因子組合物NC-3與權利要求4所述的無血清液態完全培養基按照體積比1∶1000配制細胞培養液。

8.根據權利要求4～7中任意一項所述的方法，其特征在于，將包含容器和裝入容器的上述培養基、誘導因子組合物制備成試劑盒用于從單個核細胞誘導、擴增培養獲得大量適于臨床應用的N-CIK細胞。

9.一種N-CIK細胞鑒定試劑盒，其特征在于，它包含四組雙色抗體組合物，分別是C-1：FITC-IgG/PE-IgG，C-2：FITC-CD3/PE-CD56，C-3：FITC-CD3/PE-CD8，C-4：FITC-CD3/PE-CD4；其特征在于，每兩種抗體按照體積比1∶1混合并裝于1支專用棕色管中，以用于N-CIK細胞熒光鑒定；

根據權利要求3、9所述的鑒定試劑盒，其特征在于，細胞鑒定試劑盒其特征還在于所有試劑耗材均在符合GMP標準條件下包裝制備，除抗體外還包括洗滌液和固定液各1瓶，供混合的兩種抗體采用FITC和PE按照體積比1∶1混合并裝于1支專用棕色管中，洗滌液成分為是牛血清和醫用生理鹽水體積比2∶98，固定液成分是每100mL磷酸緩沖液含1～2g多聚甲醛。