[發明專利]一種PCR微陣列檢測多種流感病毒的試劑盒

有效

• 申請號: 201010229512.7
• 申請日: 2010-07-16
• 公開（公告）號: CN102337352A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 李明;陳華云;高秀潔
• 申請（專利權）人: 中山大學達安基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種PCR微陣列方法檢測多種流感病毒的試劑盒，包括：1)PCR微陣列反應板、PCR反應液，2)分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒，其特征在于PCR微陣列反應板由PCR反應板以及加在各反應孔中的引物探針混合液所組成，引物探針混合液包括針對不同流感病毒的引物和探針，其中引物終濃度均為0.2mmol/L，探針終濃度均為0.1mmol/L。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于各反應孔中的引物探針混合液針對不同流感病毒使用相應的引物和探針，其中：

甲型流感病毒對應的正向引物和反向引物序列為5’-ATGAGTCTTCTAACCGAGGTCGA-3’和5’-AATCCCCTTAGTCAGAGGTGACAG-3’，探針序列為：5’-CATCCCGTCAGGCCCCCTCAA-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；

乙型流感病毒對應的正向引物和反向引物序列為5’-GATGGCCATCGGATCCTCA-3’和5’-CCGTGACCAGTCTAATTGTCTCC-3’，探針序列為：5’-AATTGGGATAAGACTCCCACCGCAG-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；

甲型H1N1流感病毒對應的正向引物和反向引物序列為5’-CCTATTTGGGGCCATTGCC-3’和5’-ATCTCGTCAATGGCATTCTGTG-3’，探針序列為：5’-CCGACCTGAAGAGCACACAGAATGC-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；

禽流感病毒H5亞型對應的正向引物和反向引物序列為5’-GAAGGGAATTTAATAACTTG-3’和5’-GTTCAGCATTATAAGTCC-3’，探針序列為：5’-CAAGAAGATGGAAGACGGGTTCCTAGATGTC-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；

禽流感病毒H7亞型對應的正向引物和反向引物序列為5’-GATCAATGTATGGAGAGCAT-3’和5’-GTATTCTATTCTGCAGTGACTC-3’，探針序列為：5’-CAACACTTATGACCATACCCAATACAGAAC-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；

禽流感病毒H9亞型對應的正向引物和反向引物序列為5’-GCTGTGTGCAACAAATCTGG-3’和5’-CAACAGTAGATCACAGGAAG-3’，探針序列為：5’-CGTCCCCTCATTCTGGACACCTGTACCAT-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；

人流感病毒H1亞型對應的正向引物和反向引物序列為5’-TCCCCAAAGAGAGCTCATG-3’和5’-CTGCTTTCCCCATTATG-3’，探針序列為：5’-CCCAACCACACCGTAACCGGAGTATCAGC-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；

人流感病毒H3亞型對應的正向引物和反向引物序列為5’-CATTCCAAAATGTAAACAG-3’和5’-CAATTTCAGAGTGTTTTGC-3’，探針序列為：5’-CACATACGGGGCCTGTCCCAGATAT-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征還在于PCR反應液由PCR反應緩沖液、PCR反應所需的酶組成，其中PCR反應緩沖液由pH值為8.0的50mmol/L?Tris-HCl、8mmol/L?MgCl₂、250mmol/L?KCl、5％甲酰胺和25mmol/L?dNTPs組成。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征還在于PCR反應所需的酶包括熱啟動Taq酶、MMLV，其中每人份PCR反應液中熱啟動Taq酶的用量為5U、MMLV用量為3U。

5.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于PCR擴增的條件為50℃?15分鐘，95℃?15分鐘；94℃?15秒，58℃?45秒，40個循環。