[發明專利]一種中壓柱快速分離油茶餅粕中黃酮苷的制備方法

有效

• 申請號: 201010229218.6
• 申請日: 2010-07-19
• 公開（公告）號: CN101899070A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 王成章;陳虹霞;葉建中;周昊;原姣姣
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林產化學工業研究所
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H17/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及植物提取物技術領域，特別涉及一種中壓快速分離方法從油茶餅粕中制備黃酮苷類化合物。

背景技術

油茶(Camellia?oleifera?Abel.)，別名茶籽樹、油茶樹、白花茶，屬山茶科(Theacea)山茶屬(Camellia)植物，為多年生喬木或灌木，品種多達百余種。油茶是我國特有的木本油料，在我國有2000多年的栽培歷史，現主要分布于我國淮河、長江流域及其以南的14個省的1100多個縣。我國每年產毛茶油僅20萬噸，而榨油后剩余的茶籽粕每年約50萬噸。經榨油后的油茶餅粕中含有蛋白質、粗纖維、糖類物質、茶皂素、單寧、生物堿、黃酮和少量的植酸以及多酚，具有很高的經濟價值。油茶種植的發展必須重視油茶籽的綜合開發利用，只有這樣才能使得油茶種植的綜合效益得到進一步體現。目前的現狀是大部分餅粕當作燃料被燒掉，或廉價出口到日本、東南亞等國家和地區，這種局面應該得到改觀。茶皂素是一種天然非離子型表面活性劑，具有良好的乳化、分散、濕潤、發泡、穩泡和去污等性能，可廣泛應用于日化、建材、食品等行業。其生物活性主要表現在溶血和魚毒性、抗滲消炎、止咳鎮痛、抗菌、殺蟲以及抑制酒精吸收、類生物激素性等方面。目前國內外對茶籽餅粕中茶皂素進行了大量的研究，并且在國內外市場上也已經有很多成品在出售。但是油茶餅粕中還有其它有效成分如黃酮苷，黃酮及黃酮苷類是一大類天然化學產物，在植物界分布廣泛，從植物中提取的該類化學產物具有保護心腦血管、抗炎、抗氧化、改善記憶，抗抑郁，抗焦慮、中樞抑制和神經保護等多種生理活性，它是許多中草藥的主要活性成分，其中有許多被開發成新型植物藥，如銀杏總黃酮、大豆異黃酮等，獲得良好效果。

國內文獻有報道，俞斌等人采用硅膠柱層析從油茶枯餅中分離得到兩種主要黃酮苷，并建立了它的液相色譜分析方法，但是普通的硅膠柱層析分離過程緩慢，得率低。利用新的中壓柱快速分離方法制備油茶枯餅中的兩種黃酮苷，得到高含量高得率的黃酮苷化合物，國內沒有任何報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用中壓快速分離油茶餅粕中的黃酮苷類化合物的方法，該方法工藝簡單，得到的產品含量高，適合大批量制備。

本發明的技術方案為：中壓柱快速分離油茶餅粕中黃酮苷的制備方法，包括以下步驟：

第一步，脫脂：

油茶籽脫殼，籽破碎，采用石油醚、乙醚、正己烷、戊烷和正戊烷等有機溶劑脫脂，茶籽質量與有機溶劑的體積比例為1∶15-35g/mL，溫度30℃-80℃，提取1-3h，提取1-4次，過濾后得到濾渣，得到脫脂的油茶籽粕；

第二步，提取：

將油茶籽粕以1g原料加入15-30mL的不同濃度醇水溶液提取1-4次，提取溫度60-80℃，提取時間1-3h，提取后，過濾，合并濾液，真空濃縮得到油茶粕黃酮苷粗提取物；

第三步，萃取：

將提取物得到的浸膏用正丁醇等有機溶劑萃取2-5次，將水層濃縮，得到粗提物；

第四步，中壓柱純化：

將油茶粕黃酮苷粗提取物與中壓柱填料按質量比1∶15-50吸附，洗脫劑為氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、甲醇、乙醇和水中的一種或幾種的混合溶液，中壓柱柱長20-300cm，柱直徑2-30cm，柱壓為3-20MPa，檢測波長220-360nm，流速2-200mL/min，富集黃酮苷部位，室溫真空回收溶劑，經HPLC分析，制備得到90％以上黃酮苷化合物；

第五步，HPLC制備分離：

以中壓制備得到的90％以上的黃酮苷混合物為原料，采用高效液相進行制備，在此色譜條件下：色譜柱XB-C18(Φ10mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇∶水＝2∶3(V/V)，紫外270nm，流速：3mL/min。制備得到兩種黃酮苷單體，分別為山奈酚3-O-[2-O-β-D-半乳糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)和山奈酚3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ)，經HPLC分析，含量在95％以上。

本方法中采用醇溶液進行提取，經過萃取，中壓柱快速分離得到90％以上的黃酮苷化合物，再進一步通過高效液相制備分離得到兩種黃酮苷單體，經過MS、IR、¹H-NMR和¹³C-NMR鑒定為山奈酚3-O-[2-O-β-D-半乳糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)和山奈酚3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ)，其結構為：

附圖說明

圖1為中壓柱快速分離后黃酮苷化合物的HPLC色譜圖。