[發明專利]流加底料發酵罐生產納他霉素的方法

無效

• 申請號: 201010227917.7
• 申請日: 2010-07-13
• 公開（公告）號: CN101985643A
• 公開（公告）日: 2011-03-16
• 發明（設計）人: 敬科舉;曾憲海;馬尼拉法沙·伊馬努兒;郝曉兵;盧英華;姚傳義;凌雪萍;陳翠雪
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C12R1/465
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 陳永秀;馬應森

技術領域

本發明涉及一種微生物發酵生產納他霉素的工藝，尤其是以褐黃孢鏈霉菌(Streptomycesgilvosporeus)ATCC13326發酵生產納他霉素的工藝。

背景技術

納他霉素(Natamycin)是由納塔爾鏈霉菌(Streptomyces?natalensis)或塔努加鏈霉菌(Streptomyces?chatanoogensis)或褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces?gilvosporeus)發酵產生的一種二十六元多烯大環內酯類抗生素，能有效地抑制和殺死霉菌及酵母菌，是一種安全、低毒、高效、廣譜的抗真菌類抗生素和天然的生物防腐劑(Pedersen?JC.Natamycin?as?a?fungicide?in?agarmedia[J].Applied?and?Environmental?Microbiology，1992，58(3)：1064-1066)。與其它抗菌產品相比，納他霉素對哺乳動物細胞的毒性極低，可廣泛應用于由真菌引起的疾病。除此之外，納他霉素的低溶解度，可用其對食品表面進行處理以增加食品的保質期，不影響風味和口感。目前，全球有30多個國家批準將納他霉素用于乳制品、肉制品、果汁飲料、葡萄酒等的生產和保藏。納他霉素的需求量增加，市場前景巨大(Davidson?PM，Doan?CH.Natamycin[A].Antimicrobials?in?Foods[C].New?York，Basel?and?Hong?Kong：Marcel?Dekker?Inc.，1993，395-407)。

目前，國內外納他霉素的發酵水平不一，大部分發酵法生產納他霉素的產量為2～5g/L，應用前景受到限制(Mohamed?A?F，Hesham?A?E.Optimization?of?the?cultivation?medium?fornatamycin?production?by?Streptomyces?natalensis[J].Journal?of?Basic?Microbiology，2000，40(3)：157-166)。有報道(江正兵，宋慧婷，馬立新.納他霉素高產菌株的選育及納他霉素高效發酵提取純化方法。CN101307299A)通過發酵罐流加高濃度葡萄糖培養Streptomycesgilvosporeus?HBJ591突變株，獲得納他霉素產量為14g/L，為迄今為止報道的最高水平，但該方法耗糖多，糖轉化率也較為低下。通過流加底料或其他營養成分來增加納他霉素產量的研究國內外并不多見。納他霉素與其它大環內脂類抗生素的合成機理相似，都屬于聚酮體途徑，培養液中的一些蛋白、氨基酸、碳水化合物以及一些維生素和微量元素都可能對納他霉素的合成有促進作用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種流加底料發酵罐生產納他霉素的方法。

本發明以褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces?gilvosporeus)ATCC13326生產納他霉素的具體方法如下：

1)搖瓶種子培養

無菌條件下，取褐黃孢鏈霉菌孢子涂布于高氏1號瓊脂培養基斜面中，置于培養箱中培養，然后將培養好的孢子塊接入盛有搖瓶種子培養基的三角瓶中，搖床培養；

2)一級種子罐培養

將種子液按5％～10％的接種量接入盛有一級種子罐培養基的種子罐中培養；

3)二級種子罐培養

將種子液按10％～30％的接種量接入盛有二級種子罐培養基的種子罐中培養；

4)底料流加發酵罐培養

將種子液按5％～10％的接種量接入盛有發酵培養基發酵罐中，培養溫度28～30℃，轉速為100～200rpm，發酵時間120～160h，分別在發酵培養24～48h、60～80h、90～100h時，恒速流加初始培養液質量體積的5％～20％發酵培養基，待發酵液呈米黃色稍深，菌絲衰老，趨于自溶，染色淺時放罐，得納他霉素。

發酵液中納他霉素的含量可達到9.5～11.5g/L。

在步驟1)中，所述培養箱中培養的溫度可為28～30℃，培養的時間可為5～9d；所述搖瓶種子培養基為可溶性淀粉20.0～0.0g/L，葡萄糖8.0～15.0g/L，黃豆餅粉10.0～20.0g/L，酵母粉8.0～20g/L，蛋白胨5.0～10.0g/L，碳酸鈣2.0～10.0g/L，pH?7.0；所述搖床培養的轉速可為150～220rpm，搖床培養的溫度可為25～30℃，搖床培養的時間可為36～48h。