[發(fā)明專利]鴨源性冠狀病毒及其分離培養(yǎng)方法與應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010225577.4
• 申請日: 2010-07-14
• 公開（公告）號: CN101906404A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉興友;姚四新;趙淑秋;劉金華;王憲文;王麗榮;王自良;趙坤;陳仕鈞;趙樸
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技學(xué)院
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/215;A61K48/00;A61P31/14;A61P11/00;C12R1/93
• 代理公司: 鄭州大通專利商標(biāo)代理有限公司 41111
• 代理人: 樊羿

1.一種鴨源性冠狀病毒(Avian?infectious?bronchitis?virus)ZZ2004，其微生物保藏編號為CGMCC?NO.3842。

2.權(quán)利要求1所述的鴨源性冠狀病毒的分離培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

(1)在無菌條件下，采集感染所述IBV并發(fā)病的家禽的腎臟組織1g，加3～5ml滅菌PBS緩沖液反復(fù)洗滌2～3次，研磨至乳狀再加3～5ml滅菌PBS緩沖液；

(2)分裝入凍存管，反復(fù)凍融2～4次，過濾除菌；

(3)將濾液經(jīng)尿囊腔接種于9～11日齡SPF雞胚數(shù)枚，37℃培養(yǎng)72h，棄去24h內(nèi)的死胚，無菌條件下收獲尿囊液并連續(xù)盲傳5代以上，培養(yǎng)至雞胚表現(xiàn)發(fā)育不良，呈蜷縮胚、胚體出血；

(4)對分離毒株不同代次雞胚尿囊液做雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，取病變明顯紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)為陰性的雞胚尿囊液；

(5)取陰性的尿囊液用滅菌PBS作1∶10稀釋，取0.2ml接種于9日齡的SPF雞胚絨毛尿囊腔內(nèi)，37℃孵化36～48h，置4℃下12h后收獲雞胚尿囊液即可。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鴨源性冠狀病毒的分離培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述步驟(5)之后還包括濃縮步驟：取50ml上述雞胚尿囊液于滅菌的離心管3管，5000rpm離心20min；分別棄沉淀，取上清液于另一滅菌的離心管中，12000rpm離心20min；分別棄沉淀，取上清液加入50ml的超速離心管，不足的以滅菌PBS補(bǔ)足，40000rpm離心4小時(shí)；棄上清液，取沉淀以1ml滅菌PBS懸浮后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4.權(quán)利要求1所述鴨源性冠狀病毒在制備防治雞傳染性支氣管炎疫苗中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求1所述鴨源性冠狀病毒在制備防治雞傳染性支氣管炎藥物中的應(yīng)用。