[發明專利]柯薩奇病毒實時熒光RT-PCR檢測方法和試劑盒無效
| 申請號： | 201010222095.3 | 申請日： | 2010-07-07 |
| 公開（公告）號： | CN102312017A | 公開（公告）日： | 2012-01-11 |
| 發明（設計）人： | 李想;潘良文;李俊毅;黃一;盧鐘山;張舒亞;呂蓉 | 申請（專利權）人： | 上海出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海專利商標事務所有限公司 31100 | 代理人： | 徐迅 |
| 地址： | 200135 上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 柯薩奇 病毒 實時 熒光 rt pcr 檢測 方法 試劑盒 | ||
1.一種聚合酶鏈式反應方法，其特征在于，它包括步驟：在聚合酶反應體系中進行聚合酶鏈式反應，所述的反應體系中含有擴增柯薩奇病毒的特異性引物對和柯薩奇病毒特異性探針，并且所述引物擴增出的擴增產物具有柯薩奇病毒基因組VP1區的核苷酸序列。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的擴增柯薩奇病毒的特異性引物對包括選自下組的1-5種引物對：
A9型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2；
A16型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：5；
B2型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：7和SEQ?ID?NO：8；
B3型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：10和SEQ?ID?NO：11；
B5型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：13和SEQ?ID?NO：14。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的柯薩奇病毒特異性探針是Taqman-MGB探針或Taqman探針。
4.如權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于，所述的柯薩奇病毒特異性探針具有選自下組的核苷酸序列：
A9型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：3；
A16型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：6；
B2型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：9；
B3型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：12；
B5型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：15。
5.如權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于，所述方法還包括步驟：在聚合酶鏈式反應過程中或之后，檢測柯薩奇病毒特異性探針發出的熒光信號。
6.一種檢測試劑盒，其特征在于，它含有以下試劑：
(a)擴增柯薩奇病毒的特異性引物對，并且所述引物擴增出的擴增產物具有柯薩奇病毒基因組VP1區的核苷酸序列；和
(b)檢測柯薩奇病毒的特異性探針。
7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的擴增柯薩奇病毒的特異性引物對包括選自下組的1-5種引物對：
A9型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2；
A16型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：5；
B2型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：7和SEQ?ID?NO：8；
B3型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：10和SEQ?ID?NO：11；
B5型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：13和SEQ?ID?NO：14。
8.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的柯薩奇病毒特異性探針是Taqman-MGB探針或Taqman探針。
9.如權利要求6-8中任一所述的試劑盒，其特征在于，所述的柯薩奇病毒特異性探針具有選自下組的核苷酸序列：
A9型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：3；
A16型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：6；
B2型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：9；
B3型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：12；
B5型柯薩奇病毒：SEQ?ID?NO：15。
10.如權利要求6所述的試劑盒的用途，其特征在于，用于檢測在環境樣品或人類排泄物樣品中是否存在柯薩奇病毒。
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