[發明專利]南芥菜花葉病毒的檢測方法及專用試劑盒

有效

• 申請號: 201010220136.5
• 申請日: 2010-06-28
• 公開（公告）號: CN101893631A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 李桂芬;魏梅生;馬潔;朱水芳
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種南芥菜花葉病毒的檢測方法及專用試劑盒。

背景技術

目前植物病毒的檢測方法主要包括生物學、血清學和分子生物學方法。其中血清學方法中的酶聯方法由于其簡單、重復性好、一次可處理多個樣品而在植物病毒的檢測中起到重要作用，在實際的植物病毒檢測中應用廣泛。酶聯試劑盒中必須要提供陽性對照，而傳統的陽性對照是采用某種植物病毒的感染葉片制成，如果不經過滅活處理，就有可能釋放到環境中，對農作物造成影響，對于檢疫性植物病毒如南芥菜花葉病毒等，具有侵染性的對照更是不允許釋放到環境中的。而經過滅活處理后的對照一般不易獲得。因此，需要發明一種安全的檢測方法。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種用于檢測樣品中是否含有目標物質的酶聯免疫試劑盒。

本發明所提供的用于檢測樣品中是否含有目標物質的酶聯免疫試劑盒，包括用于包被的抗體A，用于檢測的抗體B，作為陽性對照的抗體C和用于顯色的酶標抗體；所述抗體A為動物Ⅰ來源的抗目標物質的抗體，所述抗體B為動物Ⅱ來源的抗目標物質的抗體，所述抗體C為抗所述抗體A的抗體；動物Ⅰ和動物Ⅱ為不同物種的動物。

上述任一所述酶聯免疫試劑盒中，所述酶標抗體為酶標抗體D和酶標抗體E，所述抗體D為抗所述抗體B的抗體，所述抗體E為抗所述抗體D的抗體；所述抗體D為抗所述抗體C的抗體。

上述任一所述酶聯免疫試劑盒中，所述酶標抗體為酶標抗體D和酶標抗體E，所述抗體D為抗所述抗體B的抗體，所述抗體E為抗所述抗體D的抗體，所述抗體D為抗所述抗體E的抗體；所述抗體E為抗所述抗體C的抗體。

上述任一所述酶聯免疫試劑盒中，所述抗體A為小鼠來源的抗目標物質的抗體，所述抗體B為兔來源的抗目標物質的抗體，所述抗體C為山羊抗小鼠多克隆抗體，所述抗體D為山羊抗兔抗體，所述抗體E為兔抗山羊抗體。

上述任一所述酶聯免疫試劑盒中，所述目標物質為植物病毒、植物細菌或植物真菌。

上述任一所述酶聯免疫試劑盒中，所述植物病毒為南芥菜花葉病毒；所述抗體A為分泌抗南芥菜花葉病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株4G10?CGMCC?No.3672分泌的單克隆抗體，所述抗體B為兔來源的抗南芥菜花葉病毒的多克隆抗體。

所述雜交瘤細胞株4G10?CGMCC?No.3672分泌的單克隆抗體是通過體外培養所述雜交瘤細胞株4G10?CGMCC?No.3672得到的。

上述任一所述酶聯免疫試劑盒中，所述試劑盒中包括包被緩沖液、樣品抽提緩沖液、酶標抗體稀釋緩沖液、洗滌緩沖液、底物溶液；

每1升所述包被緩沖液按照如下方法配制：將碳酸鈉1.59g，碳酸氫鈉2.93g和疊氮化鈉0.20g溶于水，用水定容至1L；包被緩沖液的ρH值為9.6；

每1升所述洗滌緩沖液(PBST)按照如下方法配制：將氯化鈉8.0g，磷酸二氫鉀0.2g，磷酸氫二鈉1.15g，氯化鉀0.2g，吐溫200.5mL，疊氮化鈉0.2g溶于水中，用水定容至1L；所述洗滌緩沖液的ρH值為7.4；

每1升所述樣品抽提緩沖液按照如下方法配制：將亞硫酸鈉1.3g和聚乙烯基吡咯烷酮20g溶于PBST中，用PBST緩沖液定容至1L；

每1升所述酶標抗體稀釋緩沖液按照如下方法配制：將聚乙烯基吡咯烷酮20g和牛血清白蛋白2g溶于洗滌緩沖液中，用洗滌緩沖液定容至1L；

每1升所述底物溶液按照如下方法配制：將二乙醇胺97mL和對硝基苯磷酸二鈉(現配現用)1g溶于水中，調節ρH值至9.8，然后用水定容至1L；

所述酶標抗體中的酶是堿性磷酸酯酶。

本發明的最后一個目的是提供一種檢測樣品中是否含有目標植物病毒的方法。

本發明所提供的檢測樣品中是否含有目標植物病毒的方法，包括如下步驟：用上述任一所述酶聯免疫試劑盒對待測樣品進行檢測。

上述方法中，在進行所述檢測前，包括如下樣品前處理的步驟：所述待測樣品為植物組織，將所述植物組織與所述樣品抽提緩沖液混合，得到混合物Ⅰ；將所述混合物磨碎，得到混合物Ⅱ，即為待檢測液體。所述植物組織具體為植物葉片。

保藏編號為CGMCC?No.3672的分泌抗南芥菜花葉病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株4G10也屬于本發明的保護范圍。

由分泌抗南芥菜花葉病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株4G10?CGMCC?No.3672分泌得到的單克隆抗體也屬于本發明的保護范圍。

本發明的試劑盒中，所用水均為蒸餾水。