[發明專利]南芥菜花葉病毒的檢測方法及專用試劑盒

有效

• 申請號: 201010220136.5
• 申請日: 2010-06-28
• 公開（公告）號: CN101893631A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 李桂芬;魏梅生;馬潔;朱水芳
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種用于檢測樣品中是否含有目標物質的酶聯免疫試劑盒，包括用于包被的抗體A，用于檢測的抗體B，作為陽性對照的抗體C和用于顯色的酶標抗體；所述抗體A為動物Ⅰ來源的抗目標物質的抗體，所述抗體B為動物Ⅱ來源的抗目標物質的抗體，所述抗體C為抗所述抗體A的抗體；動物Ⅰ和動物Ⅱ為不同物種的動物。

2.根據權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述酶標抗體為酶標抗體D和酶標抗體E，所述抗體D為抗所述抗體B的抗體，所述抗體E為抗所述抗體D的抗體；所述抗體D為抗所述抗體C的抗體。

3.根據權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述酶標抗體為酶標抗體D和酶標抗體E，所述抗體D為抗所述抗體B的抗體，所述抗體E為抗所述抗體D的抗體，所述抗體D為抗所述抗體E的抗體；所述抗體E為抗所述抗體C的抗體。

4.根據權利要求3所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述抗體A為小鼠來源的抗目標物質的抗體，所述抗體B為兔來源的抗目標物質的抗體，所述抗體C為山羊抗小鼠多克隆抗體，所述抗體D為山羊抗兔抗體，所述抗體E為兔抗山羊抗體。

5.根據權利要求1-4中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述目標物質為植物病毒、植物細菌或植物真菌。

6.根據權利要求1-5中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述植物病毒為南芥菜花葉病毒；所述抗體A為分泌抗南芥菜花葉病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株4G10?CGMCC?No.3672分泌的單克隆抗體，所述抗體B為兔來源的抗南芥菜花葉病毒的多克隆抗體。

7.根據權利要求1-6中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中包括包被緩沖液、樣品抽提緩沖液、酶標抗體稀釋緩沖液、洗滌緩沖液、底物溶液；

每1升所述包被緩沖液按照如下方法配制：將碳酸鈉1.59g，碳酸氫鈉2.93g和疊氮化鈉0.20g溶于水，用水定容至1L；包被緩沖液的ρH值為9.6；

每1升所述樣品抽提緩沖液按照如下方法配制：將亞硫酸鈉1.3g和聚乙烯基吡咯烷酮20g溶于PBST緩沖液中，用PBST緩沖液定容至1L；

每1升所述洗滌緩沖液按照如下方法配制：將氯化鈉8.0g，磷酸二氫鉀0.2g，磷酸氫二鈉1.15g，氯化鉀0.2g，吐溫20?0.5mL，疊氮化鈉0.2g溶于水中，用水定容至1L；所述洗滌緩沖液的ρH值為7.4；

每1升所述酶標抗體稀釋緩沖液按照如下方法配制：將聚乙烯基吡咯烷酮20g和牛血清白蛋白2g溶于洗滌緩沖液中，用洗滌緩沖液定容至1L；

每1升所述底物溶液按照如下方法配制：將二乙醇胺97mL和硝基苯磷酸二鈉1g溶于水中，調節ρH值至9.8，然后用水定容至1L；

所述酶標抗體中的酶是堿性磷酸酯酶。

8.一種檢測樣品中是否含有目標植物病毒的方法，包括如下步驟：用權利要求1-7中任一所述酶聯免疫試劑盒對待測樣品進行檢測。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述方法中，在進行所述檢測前，包括如下樣品前處理的步驟：所述待測樣品為植物組織，將所述植物組織與所述樣品抽提緩沖液混合，得到混合物Ⅰ；將所述混合物磨碎，得到混合物Ⅱ，即為待檢測液體；

和/或，所述植物組織為植物葉片。

10.保藏編號為CGMCC?No.3672的分泌抗南芥菜花葉病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株4G10；或由分泌抗南芥菜花葉病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株4G10?CGMCC?No.3672分泌得到的單克隆抗體。