[發明專利]一種新型miRNA和編碼蛋白基因共表達載體

無效

• 申請號: 201010216793.2
• 申請日: 2010-07-05
• 公開（公告）號: CN102311973A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 吳小兵;田文洪;董小巖;董哲岳
• 申請（專利權）人: 北京五加和分子醫學研究所有限公司;中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術發明領域。本發明具體涉及一種miRNA和編碼蛋白基因的共表達載體pAAV2mir，該表達載體主要由AAV2的ITR、啟動子、mmvm內含子(modified?minute?virus?of?mice?intron)、以供編碼蛋白基因插入的多克隆位點MCS和BGH?poly(A)等元件組成，其中mmvm內含子中包含多克隆位點，用于pri-miRNA的插入。使用時將單個或多個pri-miRNA序列插入mmvm內含子的多克隆位點之間，同時插入相應編碼蛋白基因，實現miRNA和編碼蛋白基因的共表達。并且該載體攜帶AAV2的ITR序列，可進一步包裝成AAV病毒，依賴于AAV病毒的不同血清型的組織特異性嗜性，實現miRNA和編碼蛋白基因的相對組織特異性表達。本載體可用于miRNA和編碼蛋白基因的共表達以及miRNA功能、miRNA與蛋白質之間的相互作用等研究。?

背景?

miRNA(microRNA)是生物體內源的長度為18～25個核苷酸的非編碼RNA(Bartel?DP.MiRNAs：genomics，biogenesis，mechanism，and?function.Cell，2004，116(2)：281-297.)。目前，在人類中已發現700多種miRNA(Griffiths-Jones?S.，The?microRNA?Registry，Nucleic?Acids?Res，2004，32：D109-D111.)。在體內，miRNA與AGO等蛋白形成RISC(RNA?Induced?Silencing?Complex)，識別并結合mRNA?3’UTR的靶序列，導致mRNA的降解和翻譯抑制，在轉錄后水平上對基因的表達進行負調控(Doench?JG，Sharp?PA.Specificity?of?microRNA?targetselection?in?translation?repression.Genes?Dev，2004，18(5)：504-511.)。研究發現，miRNA參與人類大約三分之一基因的表達調控(Lewis?BP，Burge?CB，Bartel?DP.Conserved?seed?pairing，often?flanked?by?adenosines，indicates?that?thousands?ofhuman?genes?are?microRNA?targets.Cell，2005，120(1)：15-20.)，在細胞分裂(Careton?M，Cleary?MA，Linsley?PS.MicroRNAs?and?cell?cycle?regulation.CellCycle，2007，6(17)：2127-2132.)、分化(Iovino?N，Pane?A，Gaul?U.miR-184?hasmultiple?roles?in?Drosophila?female?germline?development.Dev?Cell，2009，17(1)123-133.)、死亡(Ambros?V.MicroRNA?pathways?in?flies?and?worms：growth，death，?fat，stress，and?timing[Erratum?Cell，2003，114(2)：269].Cell，2003，113(6)：673-676.)、凋亡(Jovanovic?M，Henqartner?MO.miRNAs?and?apoptosis：RNAs?todie?for.Oncogene，2007，25(46)：6176-6187.)、新陳代謝(Dang?CV，Le?A，Gao?P.MYC-induced?cancer?cell?energy?metabolism?and?therapeutic?opportunities.ClinCancer?Res，2009，15(21)：6479-6483.)以及干細胞的分化(Xu?N，Papagiannakopoulos?T，Pan?GJ，et?al.MicroRNA-145?regulates?OCT4，SOX2，and?KLF4?and?represses?pluripotency?in?human?embryonic?stem?cells.Cell，2009，137(4)：647-658.)、腫瘤的發生(Schichel?R，Boyerinas?B，Park?SM，et?al.MicroRNAs：key?players?in?the?immune?system，differentiation，tumorigenesis?andcell?death.Oncogene，2008，27(45)：5959-5974.)等諸多生理病理過程中發揮重要作用。?