[發(fā)明專利]一種新型miRNA和編碼蛋白基因共表達(dá)載體

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010216793.2
• 申請(qǐng)日: 2010-07-05
• 公開（公告）號(hào): CN102311973A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳小兵;田文洪;董小巖;董哲岳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京五加和分子醫(yī)學(xué)研究所有限公司;中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所
• 主分類號(hào): C12N15/86
• 分類號(hào): C12N15/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種新型miRNA和編碼蛋白基因共表達(dá)載體，其技術(shù)特征在于：主要由AAV2?ITR、啟動(dòng)子、mmvm內(nèi)含子、編碼蛋白基因和BGH?poly(A)等元件組成；miRNA和報(bào)告基因或功能蛋白基因的共表達(dá)。

2.如權(quán)利要求1所述的共表達(dá)載體，其特征在于，攜帶AAV2?ITR序列，可進(jìn)一步包裝成AAV病毒，依賴于AAV病毒的不同血清型的組織特異性嗜性，實(shí)現(xiàn)miRNA和編碼蛋白基因的相對(duì)組織特異性表達(dá)。

3.如權(quán)利要求2所述的共表達(dá)載體，其特征在于，所述的AAV病毒的血清型包括AAV1、AAV2、AAV5、AAV8、AAV9以及AAV病毒包括ssAAV病毒和scAAV病毒兩種類型。

4.如權(quán)利要求1所述的共表達(dá)載體，其特征在于，所述的啟動(dòng)子包括CMV啟動(dòng)子、CAG啟動(dòng)子、PGK啟動(dòng)子。

5.如權(quán)利要求1所述的共表達(dá)載體，其特征在于，所述的mmvm內(nèi)含子來源于mvm內(nèi)含子，在其5′splice?site和分支位點(diǎn)(Branch-point?domain)之間插入多克隆位點(diǎn)(MCS)，以供單個(gè)或多個(gè)pri-miRNA序列的插入。

6.如權(quán)利要求1所述的共表達(dá)載體，其特征在于，所述的編碼蛋白基因包括：如螢火蟲螢光素酶基因(Fluc)、Gaussia螢光素酶基因(Gluc)、紅色熒光蛋白基因(RFP)、綠色熒光蛋白基因(EGFP)的報(bào)告基因；如MYC、c-MYC的原癌基因和如P53的抑癌基因。

7.如權(quán)利要求1所述的共表達(dá)載體，其特征在于，可實(shí)現(xiàn)單個(gè)或多個(gè)miRNA與報(bào)告基因的共表達(dá)，也可實(shí)現(xiàn)單個(gè)或多個(gè)miRNA與功能蛋白基因的共表達(dá)，如miR34a與P53、miR21和miR155與MYC，包括這些組合但不限于這些組合。

8.如權(quán)利要求1所述的共表達(dá)載體，其特征在于，表達(dá)的miRNA、報(bào)告基因和功能蛋白基因既可以是天然的，又可以是經(jīng)過人工改造過的或人工合成的。

9.如權(quán)利要求1所述的共表達(dá)載體，其特征在于，可用于miRNA的功能和miRNA與蛋白相互作用關(guān)系研究，并可用于疾病的治療和動(dòng)物模型的構(gòu)建。