[發明專利]長雙歧桿菌粘附抑制蛋白Aip在防治腹瀉中的應用

有效

• 申請號: 201010212682.4
• 申請日: 2010-06-29
• 公開（公告）號: CN101884782A
• 公開（公告）日: 2010-11-17
• 發明（設計）人: 魏華;徐鋒;彭珍;譚強來;徐迪;萬翠香;熊勇華
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16;C12P21/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16;A61P1/12;C12R1/01
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種長雙歧桿菌粘附抑制蛋白Aip在防治腹瀉中的應用，其特征是：粘附抑制蛋白Aip阻抑致病菌粘附定植于腸道，而不影響益生菌的粘附，從而防治致病菌引發的腹瀉，維持腸道微生態平衡。

2.根據權利要求1所述的長雙歧桿菌粘附抑制蛋白Aip在防治腹瀉中的應用，其特征是所述的粘附抑制蛋白Aip的制備方法為：

(1)將新鮮培養的長雙歧桿菌按1％接入300mL?MRS液體培養基，37℃、厭氧培養16-18h，8000rpm離心3min，收集發酵液上清；

(2)分別按照15％和75％飽和度用硫酸銨分級沉淀上清，最后沉淀用20mLPBS重懸，脫鹽，真空冷凍干燥；

(3)取1ml?0.5mg/ml的粗蛋白用預裝離子柱Hitrap?Q?FF進行離子交換層析，首先用起始緩沖液平衡層析柱，所述的起始緩沖液為0.025mol/L磷酸鉀緩沖液和0.001mol/L?EDTA的混合物并調節pH為8.0，用洗脫緩沖液進行線性濃度梯度洗脫，流速為1ml/min，分別收集各洗脫峰，電泳檢測，確定目的峰所在，所述的洗脫緩沖液為0.025mol/L磷酸鉀緩沖液、1mol/L氯化鉀和0.001mol/L?EDTA的混合物并調節pH為8.0；

(4)收集的目的峰再用分子篩柱Hi?trapSuperdex75進行分離，流動相為Millipore超純水，流速為0.5ml/min，收集各流出峰，電泳檢測，確定目的峰所在。