[發明專利]鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統及構建方法和應用

有效

• 申請號: 201010208250.6
• 申請日: 2010-06-13
• 公開（公告）號: CN102277368A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 陳化蘭;柳金雄;步志高;姜永萍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/38;C12N7/01;A61K39/245;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王旭

1.構建鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統的方法，所述方法包括：

1)切斷所述鴨病毒性腸炎病毒的DNA，

2)將切斷后的鴨病毒性腸炎病毒DNA片段連接到粘粒上，

3)選擇多個粘粒組成所述鴨病毒性腸炎病毒感染性克隆系統，其中每個粘粒中克隆有鴨病毒性腸炎病毒疫苗株基因片段，所述鴨病毒性腸炎病毒疫苗株基因片段含有相互重疊的區域，并拼接覆蓋鴨病毒性腸炎病毒疫苗株全基因組，和

4)將外源基因插入至少一個所述粘粒中的復制非必須區。

2.權利要求1所述的構建鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統的方法，其特征在于所述粘粒是Fosmid，優選為pCC1?Fos。

3.權利要求1所述的構建鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統的方法，其特征在于在所述鴨病毒性腸炎病毒是鴨病毒性腸炎病毒CVCCAV1222。

4.權利要求1所述的構建鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統的方法，其特征在于所述多個粘粒是5個粘粒，優選地，所述5個粘粒分別為pFOS1、pFOS2、pFOS3、pFOS4和pFOS5，其中克隆的鴨病毒性腸炎病毒疫苗株基因片段的序列分別為鴨病毒性腸炎病毒CVCC?AV1222的1-44551位、36852-75346位、69314-109887位、98197-129146位和119308-158091位。

5.權利要求1所述的構建鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統的方法，其特征在于所述復制非必須區位于pFOS1中的UL45和UL46基因之間，pFOS1中的UL41基因內，或pFOS5中的US7和US8基因之間。

6.根據權利要求1-5中任一項所述方法構建的鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統。

7.一種鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統，其特征在于所述系統包括多個粘粒，每個粘粒中克隆有鴨病毒性腸炎病毒疫苗株基因片段，所述鴨病毒性腸炎病毒疫苗株基因片段含有相互重疊的區域，并拼接覆蓋鴨病毒性腸炎病毒疫苗株全基因組，其中至少一個所述粘粒的復制非必須區中插入有外源基因。

8.權利要求6或7的鴨病毒性腸炎病毒感染性重組克隆系統用于構建重組鴨病毒性腸炎病毒的應用。

9.利用權利要求6或7的方法獲得的重組鴨病毒性腸炎病毒株，例如rDEVul4546，其保藏號為CCTCC?V201012；rDEVus78，其保藏號為CCTCCV201010；和rDEVul41，其保藏號為CCTCC?V201011。

10.權利要求9的重組鴨病毒性腸炎病毒株在制備用于預防所述鴨病毒性腸炎病毒感染所引起的疾病的藥物中的應用。