[發明專利]一種核酸檢測方法及其專用試劑盒

無效

• 申請號: 201010206550.0
• 申請日: 2010-06-12
• 公開（公告）號: CN101845511A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 王景林;陳唯軍;高興;李春娟;吳偉力;蘇利波;康琳;高珊
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種核酸檢測的試劑盒，包括：

捕獲探針，所述捕獲探針包括由20-50個核苷酸組成的單鏈核酸片段A，所述單鏈核酸片段A與待測核酸片段的區域片段A’完全反向互補或完全相同，所述單鏈核酸片段A的3’末端是所述捕獲探針的3’末端；

和雜交探針，所述雜交探針包括由20-30個核苷酸組成的單鏈核酸片段B，所述單鏈核酸片段B與待測核酸片段的區域片段B’完全反向互補或完全相同，所述單鏈核酸片段B的5’末端是所述雜交探針的5’末端；

所述單鏈核酸片段A的3’末端有羥基，所述單鏈核酸片段B的5’末端有磷酸基團；所述待測核酸片段包括自上游至下游依次連接的區域片段A’和區域片段B’。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述捕獲探針還包括連接在單鏈核酸片段A的5’末端的0-30個T；優選是10個T。

3.如權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述捕獲探針的5’末端經氨基修飾。

4.如權利要求1-3中任一所述的試劑盒，其特征在于：雜交探針的3’末端連有探針標記物，所述探針標記物優選是熒光素。

5.如權利要求1-3中任一所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括標記探針，所述標記探針包括帶有探針標記物的單鏈的通用片段C，所述通用片段C的3’末端是所述標記探針的3’末端，所述探針標記物優選是熒光素；

所述雜交探針還包括連接在所述單鏈核酸片段B的3’末端的通用片段B；

所述通用片段C與所述通用片段B完全反向互補。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述通用片段B是與所述捕獲探針以及所述待測核酸片段均不雜交的片段；優選是序列表中序列2所示的20個核苷酸組成的片段。

7.一種核酸檢測的方法，包括如下步驟：

1)將權利要求1-6中任一所述的試劑盒中的捕獲探針制成基因芯片，然后將待測核酸片段與所述基因芯片進行第一次雜交；

2)在步驟1)的基礎上，將所述試劑盒中的雜交探針加到所述基因芯片上進行第二次雜交；

3)在步驟2)的基礎上，將所述捕獲探針單鏈核酸片段A的3’末端羥基與所述雜交探針單鏈核酸片段B的5’末端磷酸基團在連接酶的作用下形成穩定化學鍵，從而所述捕獲探針與所述雜交探針連接，得到探針連接物；

4)在步驟3)的基礎上，針對探針連接物上進行檢測。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于：步驟2)中，所述雜交探針是權利要求4中所述的雜交探針；步驟4)中，所述針對探針連接物進行檢測為利用芯片掃描儀針對權利要求4所述的熒光素進行掃描，得到熒光信號。

9.如權利要求7所述的方法，其特征在于：步驟2)中，所述雜交探針是權利要求5中所述的雜交探針；步驟4)中，所述針對探針連接物進行檢測包括如下步驟：在步驟3)的基礎上，往所述基因芯片中加入權利要求5或6所述的標記探針進行顯色雜交，然后利用芯片掃描儀針對權利要求5或6所述的熒光素進行掃描，得到熒光信號。