[發明專利]預防不同血清群問號鉤端螺旋體感染的通用型三價基因重組疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 201010206462.0
• 申請日: 2010-06-21
• 公開（公告）號: CN101874898A
• 公開（公告）日: 2010-11-03
• 發明（設計）人: 嚴杰
• 申請（專利權）人: 嚴杰
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/02;A61K39/116;C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00;A61P31/04
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 王洪新

技術領域

本發明涉及一種疫苗及其制備方法，尤其是用于預防鉤端螺旋體病的三價基因重組疫苗及其制備方法。

背景技術

由致病的問號鉤端螺旋體(Leptospira?interrogans)感染所引起的鉤端螺旋體病是全世界流行的自然疫源性人獸共患傳染病，尤其好發于水稻種植地區，因而我國是鉤端螺旋體病流行的主要疫區之一。

問號鉤端螺旋體自然宿主動物眾多，感染后無癥狀或癥狀輕微，通常不死亡，但可從尿液中排出問號鉤端螺旋體，直接污染水源或經土壤污染水源(疫水)。由于問號鉤端螺旋體在多種水系中能存活較長時間并可經疫水迅速傳播，故鉤端螺旋體病是洪澇、地震等自然災害時重點防疫的傳染病之一。我國地域遼闊，自然災害頻繁，因而始終存在著鉤端螺旋體病暴發流行的危險。2005年，鉤端螺旋體病被列為國家重點監測的13種重大傳染病之一，最近又被列入國家計劃免疫項目之中。

接種疫苗是預防和控制鉤端螺旋體病最為經濟和有效的措施。目前國際上有兩種鉤端螺旋體疫苗產品：多價全菌死疫苗和多價外膜疫苗，目前以前者應用為主。然而，上述疫苗在預防鉤端螺旋體病中存在的問題是：①問號鉤端螺旋體血清群眾多，不同地區流行的鉤端螺旋體血清群可有差別，多價全菌死疫苗或多價外膜疫苗對疫苗中不包含的問號鉤端螺旋體血清群感染僅有微弱保護力甚至無保護力；②鉤端螺旋體病病人主要是農民，由于多價鉤端螺旋體全菌死疫苗、多價鉤端螺旋體外膜疫苗均含脂多糖內毒素，故副作用很大，接種者數日內不能進行體力勞動，嚴重影響了免疫接種的積極性。因此，研制對不同血清群鉤端螺旋體有廣泛交叉保護作用通用型疫苗，對于鉤端螺旋體病預防和控制具有極為重要的意義并有廣闊的應用前景。

基因工程疫苗以人工重組表達的蛋白分子為抗原，免疫成分明確，無明顯的毒副作用，因而是當今新型疫苗研制的主要方向。病毒的抗原構造十分簡單，其基因工程疫苗的免疫保護效果較好，如乙型肝炎病毒的重組表面抗原疫苗。但細菌的抗原構造復雜，單一抗原的基因工程疫苗往往免疫保護效果不佳，這是目前尚無細菌單一抗原基因工程疫苗產品的主要原因，采用多抗原是提高基因工程疫苗免疫保護效果的有效途徑之一。

屬特異性抗原是所有鉤端螺旋體血清群均含有的一類抗原。我們發現，外膜脂蛋白LipL32和LipL21及穿膜蛋白OmpL1是我國15群15型鉤端螺旋體參考標準株、鉤端螺旋體分離株均表達的外膜蛋白抗原，其中LipL21編碼基因只有一個基因型，OmpL1和LipL32編碼基因分別有3個(ompL1/1、ompL1/2和ompL1/3)和2個基因型(lipL32/1和lipL32/2)，但各基因型表達產物抗血清對我國15群15型問號鉤端螺旋體參考標準株均有不同程度的交叉凝集，表明OmpL1和LipL32也是屬特異性表面蛋白抗原。黃疸出血群是我國主要流行的問號鉤端螺旋體血清群，70％鉤端螺旋體病例均為感染問號鉤端螺旋體黃疸出血群所致，其余30％鉤端螺旋體病例為感染問號鉤端螺旋體流感傷寒群、秋季群、波摩那群、澳洲群、犬群、七日熱群等所致。上述問號鉤端螺旋體各血清群lipL32基因型均為lipL32/1型，問號鉤端螺旋體黃疸出血群、波摩那群、澳洲群、犬群、七日熱群ompL1基因型為ompL1/2型，流感傷寒群、秋季群為ompL1/1型。因此，我們采用黃疸出血群賴型賴株LipL32/1、LipL21和OmpL1/2作為問號鉤端螺旋體通用性三價基因重組新疫苗的抗原。

發明內容

本發明的目的是要填補現有問號鉤端螺旋體多價全菌死疫苗和多價外膜疫苗的缺陷，提供一種能有效預防不同血清群問號鉤端螺旋體感染且制造成本較低的通用型三價基因重組疫苗及其制備方法。