[發明專利]提供作物廣譜病毒抗性的包含木瓜環斑病毒輔助組分蛋白酶基因的基因轉移載體及其應用

有效

• 申請號: 201010203078.5
• 申請日: 2010-06-10
• 公開（公告）號: CN102277376A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 葉錫東;龔怡蓉;王惠菁;王馨蘭
• 申請（專利權）人: 葉錫東;龔怡蓉;王惠菁;王馨蘭
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N1/21;C12N15/57;C12N5/10;A01H5/00;C12R1/01
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 林曉紅

1.一種用于提供植物對病毒的抗性的重組載體，其包含控制序列以及與該控制序列可操縱連接的木瓜環斑病毒(PRSV)輔助組分蛋白酶基因(HC-Pro基因)的編碼序列片段。

2.如權利要求1所述的重組載體，其包含具有所述控制序列的二元載體以及構建于該二元載體中的所述編碼序列片段。

3.如權利要求1所述的重組載體，其中所述編碼序列片段具有與SEQID?NO：5所示序列具有85％以上的同源性的核苷酸序列。

4.如權利要求1所述的重組載體，其中所述編碼序列片段具有與SEQID?NO：6所示序列具有85％以上的同源性的核苷酸序列。

5.如權利要求1所述的重組載體，其中所述編碼序列片段具有與SEQID?NO：7所示序列具有85％以上的同源性的核苷酸序列。

6.如權利要求1至5任一項所述的重組載體，其中所述木瓜環斑病毒輔助組分蛋白酶基因的編碼序列片段位于所述控制序列下游，且所述木瓜環斑病毒輔助組分蛋白酶基因的編碼序列片段的5’端具有至少一個終止密碼子。

7.如權利要求3所述的重組載體，其為pBI-519HCF，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC?M?2010112。

8.如權利要求3所述的重組載體，其為pBI-519HCN或pBI-519HCC。

9.一種重組微生物，其是由將如權利要求1至8中任一項所述的重組載體轉化微生物中所制得的。

10.如權利要求9所述的重組微生物，其中所述微生物為去毒(disarmed)的根瘤農桿菌。

11.一種用于使植物對病毒具有抗性的方法，其包含下列步驟：

將如權利要求1至8中任一項所述的重組載體轉移至植物內，以使該植物非翻譯性表達該重組載體的木瓜環斑病毒的輔助組分蛋白酶基因的編碼序列片段的轉錄物，但不表達輔助組分蛋白酶，從而使該植物產生對于病毒的抗性。

12.如權利要求11所述的方法，其中所述植物選自于下列植物所構成的組：葫蘆科(Cucurbitaceae)以及番木瓜科(Caricaceae)植物。

13.如權利要求10所述的方法，其中所述將如權利要求1至8中任一項所述的重組載體轉移至植物內的步驟包括：

將該重組載體導入農桿菌中，以取得重組農桿菌；以及以該重組農桿菌轉染所述植物，以取得帶有該編碼序列片段的植物。

14.一種木瓜環斑病毒輔助組分蛋白酶的全長基因或其基因片段用于制造對病毒具有抗性的植物的用途，其中該木瓜環斑病毒輔助組分蛋白酶的全長基因具有如SEQ?ID?NO：8所示序列。

15.如權利要求14所述的用途，其包括將含有該木瓜環斑病毒輔助組分蛋白酶的全長基因或其基因片段的非翻譯性構建體導入至植物。

16.一種重組植物細胞，其基因組中插入有選自于下列組中的核酸分子：具有與SEQ?ID?NO：5所示序列具有85％以上同源性的核酸序列、與SEQ?IDNO：6所示序列具有85％以上同源性的核酸序列以及與SEQ?ID?NO：7所示序列具有85％以上同源性的核酸序列的核酸分子。