[發明專利]淋巴瘤相關的融合基因的聯合檢測方法及診斷試劑盒

有效

• 申請號: 201010202663.3
• 申請日: 2010-06-17
• 公開（公告）號: CN101955995A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: 邵棠;袁福美
• 申請（專利權）人: 江蘇邁迪基因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

技術領域

本發明涉及體外診斷檢測技術領域，具體涉及多種淋巴瘤相關的融合基因的液相芯片聯合檢測方法及其診斷試劑盒。

背景技術

淋巴瘤是一組起源于淋巴結或其他淋巴組織的惡性腫瘤，可分為霍奇金病(HD)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)兩大類，目前已成為最常見的十大惡性腫瘤之一。組織學可見淋巴細胞和(或)組織細胞的腫瘤性增生，臨床以無痛性、進行性淋巴結腫大為主要表現。

黏膜相關淋巴組織(MALT)淋巴瘤是一種原發于淋巴結外的惡性淋巴瘤，其發生率約占整個淋巴瘤的40％，其中以胃腸道MALT淋巴瘤最常見。API2-MALT1是MALT淋巴瘤染色體易位產生的融合基因，在約50％的MALT淋巴瘤中可被發現，目前被看作MALT淋巴瘤特征性的遺傳學改變。目前發現API2-MALT1融合基因形成的變異體主要有API2-MALT1(A1446-M541)、API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)；其中API2-MALT1(A1446-M541)相對較少，只占9％左右。

間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)是非霍奇金淋巴瘤的一種獨立類型，常呈間變性特征，是一種高度惡性淋巴瘤，5年生存率為52％。約60％-85％左右間變性大細胞淋巴瘤病例表達間變性淋巴瘤激酶(anaplastic?lymphoma?kinase，ALK)融合蛋白，這是由于2號染色體上的ALK基因位點的畸變所致。NPM-ALK是間變性大細胞淋巴瘤中染色體易位而形成的最常見的融合基因，由位于5號染色體上的核仁磷酸蛋白(NPM)基因與位于2號染色體的ALK基因相融合形成。

當前國內外廣泛使用的分子生物學檢測淋巴瘤融合基因的方法中，熒光原位雜交技術(FISH)只能進行定性檢測、操作復雜；熒光定量PCR存在著檢測通量的局限性，所以都還不能真正滿足臨床診斷檢測的需要。傳統的固相生物芯片(Biochip)技術存在著可重復性差、靈敏度不夠好以及操作繁瑣的突出弱點。因此臨床上需要有一種檢測方法，能夠迅速、穩定、準確地對白血病的多種融合基因進行聯合并行檢測，液相芯片(xMAP)技術正是這樣一種新型檢測技術。

液相芯片能夠對少量樣本進行定性、定量檢測，具有高通量、操作簡便、重復性好、靈敏度高、線性范圍寬等突出優點。該系統是由許多微球為主要基質構成的，在微球的制造過程當中，摻入了兩種不同的紅色分類熒光，根據這兩種熒光的比例不同，把球形基質分為100種，可以標記上100種不同的探針分子，能同時對一個樣品中多達100種不同的目標分子進行檢測。根據檢測物的不同，微球表面可以共價結合各種各樣的核酸檢測探針，在雜交反應進行時再加上熒光標記。在同一反應體系中可以同時加入不同的檢測微球，這樣就可以利用少量的樣本進行快速、高通量的檢測。反應結束后，通過微流體技術將微球排成單列快速流經液相芯片檢測儀，每個微球可同時被兩束激光檢測到，紅色激光激發微球上的紅色分類熒光，將各個不同的反應區分開來而定性；綠色激光則激發結合在待測樣本上的熒光標記進行定量。當標記好的待測樣本與特定微球上的探針結合在一起時，兩束激光所激發的光均可被檢測到。最后，通過計算機的高速數字信號處理器，可以自動統計分析得出特定微球上的平均熒光強度，從而確定檢測物的種類和數量。

本發明基于液相芯片技術的高通量、操作簡便、重復性好、靈敏度高、線性范圍寬等突出優點，對淋巴瘤相關的多種融合基因進行聯合檢測，能夠在臨床檢測上得到更好的應用。

發明內容

本發明需要解決的技術問題是提供一種淋巴瘤相關的融合基因的聯合檢測方法及診斷試劑盒。該方法及試劑盒包含對API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)、NPM-ALK多種融合基因聯合檢測，可以對淋巴瘤進行臨床分型，同時對患者進行療效觀察、預后及微小殘留疾病進行動態監測。本檢測方法及診斷試劑盒具有高靈敏度、高特異性、高準確度、檢測迅速等優點。

為解決上述技術問題，在本發明的一方面，提供一種淋巴瘤相關的融合基因的聯合檢測方法，包括以下步驟：