[發(fā)明專利]淋巴瘤相關(guān)的融合基因的聯(lián)合檢測方法及診斷試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010202663.3 | 申請日： | 2010-06-17 |
| 公開（公告）號： | CN101955995A | 公開（公告）日： | 2011-01-26 |
| 發(fā)明（設計）人： | 邵棠;袁福美 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇邁迪基因生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 214192 江蘇省無錫市錫山經(jīng)濟*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 淋巴瘤 相關(guān) 融合 基因 聯(lián)合 檢測 方法 診斷 試劑盒 | ||
1.一種淋巴瘤相關(guān)的融合基因的聯(lián)合檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)包含多種不同熒光編碼的羧基微球Beads，每種微球上分別共價結(jié)合針對淋巴瘤中染色體易位形成的多種融合基因的mRNA所設計的特異性核酸探針；所述的淋巴瘤中染色體易位形成的多種融合基因包含以下任意一種基因或任意組合的多種基因：API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)、NPM-ALK；
(2)針對不同淋巴瘤類型中染色體易位所形成的多種融合基因的mRNA，分別設計上下游引物，對不同的融合基因mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄PCR擴增出相應的產(chǎn)物；
(3)含有特異性核酸探針的微球與融合基因mRNA的逆轉(zhuǎn)錄擴增產(chǎn)物混合雜交，加入鏈霉親和素-藻紅蛋白Streptavidin-PE后，通過液相芯片xMAP方法檢測熒光信號；
(4)將檢測到的熒光信號與內(nèi)參基因的熒光信號進行比較，從而確定檢測樣品中是否存在淋巴瘤相關(guān)的融合基因，和/或樣品中融合基因的表達狀況。
2.如權(quán)利要求1所述的淋巴瘤相關(guān)的融合基因的聯(lián)合檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的微球是平均直徑為5.6μm，結(jié)合了不同熒光染料的聚苯烯微球，即色彩編碼微球Color-coded?beads。
3.如權(quán)利要求1所述的淋巴瘤相關(guān)的融合基因的聯(lián)合檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的共價結(jié)合于微球上的針對淋巴瘤中染色體易位形成的多種融合基因的mRNA所設計的特異性核酸探針，包括如下序列，其中5’端含氨基修飾：
API2-MALT1(A1446-M814)：5’-AminolinkerC12?GCTTTGATTCTTTTTCCTCAG-3’，如SEQ?ID?NO.1所示；
API2-MALT1(A1446-M1123)：5’-AminolinkerC12?CCAAGATTATTTAATTCATTTG-3’，如SEQ?ID?NO.2所示；
API2-MALT1(A1446-M1150)：5’-AminolinkerC12?TGCTCTTTATTATTTGATTCTT-3’，如SEQ?ID?NO.3所示；
NPM-ALK：5’-AminolinkerC12?CCTATAGTTGTTTTAAATGC-3’，如SEQ?ID?NO.4所示；
或者包含有上述序列或其互補序列的向5’端或/和3’端延長的序列；
或者與上述序列或其互補序列的同源性大于85％的序列；
或者與上述序列的堿基互補序列；
或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。
4.如權(quán)利要求1所述的淋巴瘤相關(guān)的融合基因的聯(lián)合檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的針對不同融合基因的mRNA所設計的上下游引物，包括如下序列，其中上游引物5’端含生物素標簽：
API2-MALT1(A1446-M814)：上游引物5’-biotin?CGTGGAAATGGGCTTTAGTAGAAG-3’，如SEQ?ID?NO.5所示；下游引物5’-TTGGGAAGTTGGTTCAACACAG-3’，如SEQ?IDNO.6所示；
API2-MALT1(A1446-M1123)：上游引物5’-biotin?CGTGGAAATGGGCTTTAGTAGAAG3’，如SEQ?ID?NO.7所示；下游引物5’-CGCCAAAGGCTGGTCAGTT-3’，如SEQ?ID?NO.8所示；
API2-MALT1(A1446-M1150)：上游引物5’-biotin?CGTGGAAATGGGCTTTAGTAGAAG-3’，如SEQ?ID?NO.9所示；下游引物5’-CGCCAAAGGCTGGTCAGTT-3’，如SEQ?ID?NO.10所示；
NPM-ALK：上游引物5’-biotin?TGTTGCCCAGATTGGACTCTT-3’，如SEQ?ID?NO.11所示；下游引物5’-GCAGCTTCAGTGCAATCACAG-3’，如SEQ?ID?NO.12所示；
或者包含有上述序列或其互補序列的向5’端或/和3’端延長的序列；
或者與上述序列或其互補序列的同源性大于85％的序列；
或者與上述序列的堿基互補序列；
或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。
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