[發明專利]一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法

有效

• 申請號: 201010202366.9
• 申請日: 2010-06-13
• 公開（公告）號: CN101885767A
• 公開（公告）日: 2010-11-17
• 發明（設計）人: 何社輝;何毅華;陳克堯;何詢
• 申請（專利權）人: 深圳科興生物工程有限公司
• 主分類號: C07K14/56
• 分類號: C07K14/56;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 深圳市睿智專利事務所 44209
• 代理人: 陳鴻蔭

1.一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，用于從可溶性表達重組人干擾素α1b的大腸桿菌工程菌中提取重組人干擾素α1b，包括如下步驟：

A.利用高壓勻漿機破碎含有重組人干擾素α1b的菌體；

B.將步驟A獲得的破碎菌體上樣至Streamline擴張床吸附柱，使用NaCl鹽梯度洗脫或一步法洗脫得到目標蛋白，優選采用一步法洗脫；

C.將步驟B處理后得到的目標蛋白添加NaCl到2M至2.5M，經疏水柱層析，高鹽濃度上樣、低鹽濃度洗脫；

D.將步驟C處理后得到目標蛋白經陰離子柱層析，利用緩慢的pH梯度將重組人干擾素α1b與其相關蛋白質、異構體分離；

E.采用Sephacryl凝膠過濾層析，去除高分子蛋白，獲得重組人干擾素α1b原液。

2.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：步驟A的細菌破碎過程是在Tris-EDTA緩沖液中進行，該緩沖液pH為7.0-8.0。

3.根據權利要求2所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述Tris-EDTA緩沖液pH值為7.2。

4.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟B中擴張床吸附采用Streamline?DEAE凝膠。

5.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟B擴張床吸附采用Tris-HCl緩沖液，其pH為7.0-8.0。

6.根據權利要求5所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述Tris-HCl緩沖液pH值為7.2。

7.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟B中使用NaCl鹽梯度洗脫采用0.4M的NaCl。

8.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟B中使用NaCl一步法洗脫采用0.12-0.15M的NaCl。

9.根據權利要求8所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述NaCl一步法洗脫采用0.12M的NaCl。

10.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟C中疏水柱層析采用苯基或丁基作為配基的疏水介質。

11.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟C中疏水柱層析采用Phenyl?Sepharose?HP凝膠，平衡液采用pH為6.0的PBS、2.5M的NaCl；洗脫液采用pH為6.0的PBS；采用梯度洗脫方法，梯度程序為0-100％B，15個柱床體積。

12.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟D中陰離子柱層析采用Q?Sepharose離子交換介質。

13.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟D中陰離子柱層析采用Q?Sepharose?HP凝膠，平衡液采用pH為5.5的40mM?NH₄Ac；洗脫液采用pH為4.0的40mM?NH₄Ac；梯度程序為0-100％B，20-30個柱床體積。

14.根據權利要求13所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述梯度程序可以是分步梯度程序，為先0-20％B、5min，后20-50％B、20個柱床體積。

15.根據權利要求1所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述步驟E中Sephacryl凝膠過濾層析采用Sephacryl?S-100凝膠，pH為6.5-8.0的PBS。

16.根據權利要求15所述的一種取代單克隆抗體親和層析的分離純化重組人干擾素α1b的方法，其特征在于：所述PBS的pH為7.0。