[發(fā)明專利]檢測動物鼠疫F1抗原的酶聯免疫吸附試驗夾心法試劑盒

無效

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• 申請日: 2010-06-17
• 公開（公告）號: CN101839915A
• 公開（公告）日: 2010-09-22
• 發(fā)明（設計）人: 熱娜.吐爾地;雷剛;蔣衛(wèi);閆化奎;徐兵;唐建國
• 申請（專利權）人: 新疆維吾爾自治區(qū)疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/543
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

技術領域

本發(fā)明涉及動物鼠疫疫情監(jiān)測與鼠疫診斷技術領域，是一種檢測動物鼠疫F1抗原的酶聯免疫吸附試驗夾心法試劑盒。

背景技術

鼠疫是我國《傳染病防治法》規(guī)定的甲類傳染病之一，是由鼠疫桿菌引起的一種動物源性烈性傳染病。我國已發(fā)現鼠疫自然疫源地12個類型，分布于19個省區(qū)、292個縣市旗，面積131萬km²。20世紀90年代以來，動物間鼠疫持續(xù)處于活躍狀態(tài)，人間鼠疫連年發(fā)生，鼠疫遠距離高速傳播的危險性增加。嚙齒類是鼠疫的主要宿主動物和傳染源，可自然感染鼠疫動物近200種。我國有專業(yè)機構對疫源地內鼠疫進行監(jiān)測，《全國鼠疫監(jiān)測方案》監(jiān)測動物鼠疫采用分離培養(yǎng)鼠疫菌和反相間接血凝試驗檢測鼠疫F1抗原；新鮮標本分離培養(yǎng)鼠疫菌，最快也要24h才能出結果，且分離培養(yǎng)方法只能檢測鼠疫菌活菌，不能從使用過抗菌素、沾染殺菌劑或腐敗陳舊的感染過鼠疫的動物標本獲得陽性結果；F1抗原是鼠疫菌的特異性抗原成份，反相間接血凝試驗檢測鼠疫F1抗原，腐敗變質標本常出現非特異性凝集，有時高滴度非特異性凝集掩蓋陽性反應，造成檢驗結果錯誤。ELISA間接法檢測鼠疫F1抗原，步驟多，背景顯色深。自斃動物是鼠疫監(jiān)測工作中檢測鼠疫菌及其F1抗原的重要標本，多數己腐敗甚至己經干枯，國內外都十分關注檢測腐敗變質標本中鼠疫F1抗原的準確、穩(wěn)定、簡便、快速的方法與試劑的研究。

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發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種檢測動物鼠疫F1抗原的酶聯免疫吸附試驗夾心法試劑盒，克服了現有鼠疫監(jiān)測與診斷技術中存在的問題，本發(fā)明是通過應用酶聯免疫吸附試驗夾心法（以下簡稱ELISA夾心法）檢測各種動物血液、器官、臟器組織浸液中的鼠疫菌的F1抗原的方法，經多次改進，現己制成具體有效的檢測動物鼠疫F1抗原的ELISA夾心法試劑盒，為動物鼠疫監(jiān)測和診斷提供了準確、穩(wěn)定、簡便、快速的檢測試劑與器具。

本發(fā)明的技術方案是通過以下措施來實現的：一種檢測動物鼠疫F1抗原的ELISA夾心法試劑盒，其包括酶標記抗體1支，抗體包被板1塊，甘油.PB液2ml，10×PBS.T20ml，鼠疫F1抗原陽性對照2ml，陰性對照2ml，抑制用鼠疫F1抗體1支，顯色液A液6ml，顯色液B液6ml，顯色終止液6ml；1％硫柳汞2ml；所述酶標記抗體是凍干的用辣根過氧化物酶標記的鼠疫F1抗體即HRP-F1Ab，所述抗體包被板是用鼠疫F1抗體包被酶標板即F1Ab板。

對上述本發(fā)明的技術方案可進一步進行如下的選擇或/和優(yōu)化：

上述凍干的用辣根過氧化物酶標記的鼠疫F1抗體即HRP-F1Ab按下述方法得到：

(1)辣根過氧化物酶的RZ≥3.0即HRP，稱取HRP5mg，裝入12mm×120mm試管，加入蒸溜水1m1，搖動使HRP溶解；加入新鮮配制的1.3％過碘酸鈉水溶液0.5m1，混勻置4-10⁰C30min；加入濃度按容量/容量的1％的乙二醇水溶液0.5m1，室溫20-37⁰C放置30min；加入純化的5mg/ml鼠疫F1抗體溶液1m1,混勻；

(2)把試管內的液體裝入透析袋，置4-10⁰C，用0.05mol/LpH9.6碳酸鹽緩沖液透析12-16h，將0.5％硼氫化鈉溶液0.2m1加入透析袋,混勻，4-10⁰C冰箱中靜置2h；

(3)將透析袋移入0.01mol/LpH7.2磷酸鹽緩沖液即PBS中透析6-12h，其間換PBS2次；

(4)將透析袋內的液體移入離心管，3000×g離心10min，上清液為辣根過氧化物酶標記鼠疫F1抗體即HRP-F1Ab溶液原液；取上清液，用酶聯免疫吸附試驗夾心法測定效價應在1：6000以上；用濃度按容量/容量的含50％新生小牛血清PBS稀釋，分裝，凍干，-20^OC保存；

在上述方法中：溶液濃度除注明外均為重量/容量。

上述鼠疫F1抗體包被板即F1Ab板按下述方法得到：

(1)包被用試劑：包被緩沖液：0.05mol/LpH9.6的碳酸鹽緩沖液；

鼠疫F1抗體包被液：包被緩沖液1000m1，加鼠疫F1抗體0.1-0.5mg；

飽和包被液：包被緩沖液1000m1，加牛血清白蛋白0.1g或新生小牛血清20m1；

PBS.T：10×PBS.T用0.9％NaCl液稀釋10倍。