[發明專利]檢測動物鼠疫F1抗原的酶聯免疫吸附試驗夾心法試劑盒

無效

• 申請號: 201010201991.1
• 申請日: 2010-06-17
• 公開（公告）號: CN101839915A
• 公開（公告）日: 2010-09-22
• 發明（設計）人: 熱娜.吐爾地;雷剛;蔣衛;閆化奎;徐兵;唐建國
• 申請（專利權）人: 新疆維吾爾自治區疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/543
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

1.一種檢測動物鼠疫F1抗原的酶聯免疫吸附試驗夾心法試劑盒，其特征在于包括酶標記抗體1支，抗體包被板1塊，甘油.PB液2ml，10×PBS.T20ml，鼠疫F1抗原陽性對照2ml，陰性對照2ml，抑制用鼠疫F1抗體1支，顯色液A液6ml，顯色液B液6ml，顯色終止液6ml；1％硫柳汞2ml；所述酶標記抗體是凍干的用辣根過氧化物酶標記的鼠疫F1抗體即HRP-F1Ab，所述抗體包被板是用鼠疫F1抗體包被酶標板即F1Ab板。

2.根據權利要求1所述的檢測動物鼠疫F1抗原的酶聯免疫吸附試驗夾心法試劑盒，其特征在于用辣根過氧化物酶標記的鼠疫F1抗體即HRP-F1Ab按下述方法得到：

(1)辣根過氧化物酶的RZ≥3.0即HRP，稱取HRP5mg，裝入12mm×120mm試管，加入蒸溜水1m1，搖動使HRP溶解；加入新鮮配制的1.3％過碘酸鈉水溶液0.5m1，混勻置4-10⁰C30min；加入濃度按容量/容量的1％的乙二醇水溶液0.5m1，室溫20-37⁰C放置30min；加入純化的5mg/ml鼠疫F1抗體溶液1m1,混勻；

(2)把試管內的液體裝入透析袋，置4-10⁰C，用0.05mol/LpH9.6碳酸鹽緩沖液透析12-16h，將0.5％硼氫化鈉溶液0.2m1加入透析袋,混勻，4-10⁰C冰箱中靜置2h；

(3)將透析袋移入0.01mol/LpH7.2磷酸鹽緩沖液即PBS中透析6-12h，其間換PBS2次；

(4)將透析袋內的液體移入離心管，3000×g離心10min，上清液為辣根過氧化物酶標記鼠疫F1抗體即HRP-F1Ab溶液原液；取上清液，用酶聯免疫吸附試驗夾心法測定效價應在1：6000以上；用濃度按容量/容量的含50％新生小牛血清PBS稀釋，分裝，凍干，-20^OC保存；

在上述方法中：溶液濃度除注明外均為重量/容量。

3.根據權利要求1所述的檢測動物鼠疫F1抗原的酶聯免疫吸附試驗夾心法試劑盒，其特征在于鼠疫F1抗體包被板即F1Ab板按下述方法得到：

(1)包被用試劑：包被緩沖液：0.05mol/LpH9.6的碳酸鹽緩沖液；

鼠疫F1抗體包被液：包被緩沖液1000m1，加鼠疫F1抗體0.1-0.5mg；

飽和包被液：包被緩沖液1000m1，加牛血清白蛋白0.1g或新生小牛血清20m1；

PBS.T：10×PBS.T用0.9％NaCl液稀釋10倍；

(2)鼠疫F1抗體包被酶標板：測定包被液適用鼠疫F1抗體濃度，每管加包被液200微升，28-37^OC濕盒放置4h，4-10^OC放置4-16h；

(3)飽和包被：甩棄酶標板管內的包被液，每管加飽和包被液200微升，28-37^OC濕盒放置3h；甩棄酶標板管內飽和包被液，在吸水紙上拍去管中水珠；

(4)每管加PBS.T200微升浸洗，28-37^OC濕盒放置3h；甩棄PBS.T，流水沖洗5次，在吸水紙上用力拍打酶標板，直到酶標板管內外無可見水珠；

(5)酶標板直立放入37^OC溫箱，每30min鼓風或開門通風l次，6-12h干燥后取出，酶標板經上述處理后即為鼠疫F1抗體包被酶標板；

(6)將鼠疫F1抗體板裝入塑料袋，封口；4-10^OC干燥保存；

在上述方法中：溶液濃度除注明外均為重量/容量。