[發明專利]一種Ⅳ型膠原酶含量測定方法

無效

• 申請號: 201010201541.2
• 申請日: 2010-06-17
• 公開（公告）號: CN101846632A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 凌青;余謹;趙云斌
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 北京市德權律師事務所 11302
• 代理人: 周發軍

1.一種Ⅳ型膠原酶含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

a）分別準備空白管、標準管和待測樣品管；首先向空白管、標準管和待測樣品加入底物溶液，所述底物溶液為5mg/ml～10mg/ml琥珀酰明膠；接著向空白管中加入樣品稀釋液，向標準管中加入標準品，向待測樣品管中加入待測樣品，所述樣品稀釋液為體積百分比為40mmol/l～60mmol/lTris緩沖液、5mmol/l～15mmol/lCaCl₂、10μmol/l～20μmol/lZnCl₂以及質量百分數為0.05%～0.1%月桂醇聚氧乙烯醚混合而成，所述標準品為已知濃度的Ⅳ型膠原酶；最后向標準管和待測樣品管中加入樣品稀釋液，在35^oC～45^oC水浴反應30～120分鐘；

b）在空白管、標準管和待測樣品管中加入終止液終止酶切反應，再加入檢測溶液A和檢測溶液B，最后加入檢測稀釋液，在35^oC～45^oC水浴下顯色反應30～60分鐘，使其顯色反應充分進行，所述終止液為質量百分數為0.05%～0.2%HCL,檢測溶液A為0.1M～0.5MNaOH，檢測溶液B為質量百分數為0.01%～0.05%三硝基苯磺酸，檢測稀釋液為雙蒸水；

c）各管冷卻至室溫后，取各管溶液至酶標板中，用酶標儀測定吸光度;

d）以標準物的濃度為橫坐標，測定出的吸光度值為縱坐標，繪制出標準曲線，根據待測樣品的吸光度值在標準曲線上查出相應的待測樣品的Ⅳ型膠原酶含量；或者用標準物的濃度與吸光度值算出標準曲線的方程，將待測樣品的吸光度值代入方程，計算出待測樣品的Ⅳ型膠原酶含量。

2.根據權利要求1所述的Ⅳ型膠原酶含量測定方法，其特征在于，所述標準管的數量至少為六個。

3.根據權利要求1所述的Ⅳ型膠原酶含量測定方法，其特征在于，所述待測樣品為血清或血漿。

4.根據權利要求1至3任意一項所述的Ⅳ型膠原酶含量測定方法，其特征在于，所述酶標儀在400nm～440nm處測定吸光度。