[發(fā)明專利]一種富集轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源DNA的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010200491.6
• 申請日: 2010-06-09
• 公開（公告）號: CN101864489A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許崇任;舒暢;許昌;王戎疆
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/10
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種富集轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源DNA的方法，包括以下步驟：

1)對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行DNA提取；

2)向步驟1)得到的DNA提取液中加入緩沖液和生物素標(biāo)記的核酸探針，混勻后經(jīng)過變性、退火冷卻至室溫；

3)向經(jīng)所述步驟2)獲得的溶液中，加入表面標(biāo)記有鏈霉親和素的磁珠，充分混勻后，在磁場中吸附磁珠，用緩沖液清洗磁珠；

4)將經(jīng)所述步驟3)所得的磁珠，置于緩沖液中，加熱到80℃以上，保持一段時間后，取上清溶液，獲得富集的外源DNA片段。

2.如權(quán)利要求1所述的富集轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源DNA的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述產(chǎn)品為植物組織、種子或者其經(jīng)深加工得到的產(chǎn)品。

3.如權(quán)利要求1所述的富集轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源DNA的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述緩沖液為SSPE或SSC緩沖液；所述生物素標(biāo)記的核酸探針為5’端或3’端標(biāo)記了生物素的核酸探針，長度為15～45nt，核酸探針的序列和要純化的外源基因的部分片段完全匹配；所述變性、退火冷卻至室溫是對樣品加熱到70℃以上，維持適當(dāng)?shù)臅r間，待DNA雙鏈完全解鏈，再緩慢冷卻降溫到室溫。

4.如權(quán)利要求1所述的富集轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源DNA的方法，其特征在于，在步驟3)中，所述表面標(biāo)記有鏈霉親和素的磁珠指的是表面偶聯(lián)有鏈霉親和素的磁性微球；所述緩沖液為SSPE溶液或SSC溶液。

5.如權(quán)利要求1所述的富集轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中外源DNA的方法，其特征在于，在步驟4)中，所述緩沖液是指SSPE、SSC、磷酸鹽緩沖液或TE溶液。

6.一種用于轉(zhuǎn)基因成分檢測的DNA溶液，其特征在于，該溶液通過使用權(quán)利要求1～5任一項所述富集轉(zhuǎn)基因生物及產(chǎn)品中外源DNA的方法制備。

7.一種轉(zhuǎn)基因成分檢測定量方法，其特征在于，使用權(quán)利要求6所述的用于轉(zhuǎn)基因成分檢測的DNA溶液。