[發明專利]鷓鴣B淋巴細胞刺激因子cDNA及其克隆方法和重組應用

無效

• 申請號: 201010199528.8
• 申請日: 2010-06-13
• 公開（公告）號: CN101870975A
• 公開（公告）日: 2010-10-27
• 發明（設計）人: 任文華;張雙全;陳傳梅
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: C12N15/19
• 分類號: C12N15/19;C12N15/10;C07K14/52;A61K38/19;A61P37/04
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.鷓鴣B淋巴細胞刺激因子cDNA，其特征在于，是SEQ?ID?NO.1所示的序列。

2.一種權利要求1所述的鷓鴣B淋巴細胞刺激因子cDNA的克隆方法，其步驟如下：

(1)根據已知物種的B淋巴細胞刺激因子cDNA保守序列設計引物：

正義寡核苷酸兼并引物pBAFF1：5′-CTGYYTGCARCTGATTGCWGACAG-3′，

反義寡核苷酸兼并引物pBAFF2：5′-GCACCAAARAANGTRYCRTCK?C-3’；

(2)從鷓鴣脾臟提取總RNA；

(3)通過RT-PCR方法，以上述引物pBAFF1和pBAFF2為特異性引物，擴增出一段cDNA序列，命名為P1，克隆入pMD18-T載體，并對其堿基序列進行測定；

(4)應用cDNA末端快速擴增方法，根據已獲得的P1核苷酸序列設計引物：

正義引物GSP2：5′-AGCGTGGAACAGCTCTGGAAGAACA-3′，

反義引物GSP1：5′-CTTCCAGAGCTGTTCCACGCTTAAAGC-3′，

分別用以擴增出BAFF?cDNA?3’-及5’-全長末端區域，擴增片段分別命名為P2和P3，然后分別克隆入pMD18-T載體，對其堿基序列進行測定；

(5)根據P1、P2和P3的重疊區域拼接出cDNA的全長序列，并設計首尾引物FL15′-GAGCAGCGATGAAATC?CGTGGACTG-3′，FL25′-GGCTTCAGAGGAGTCTAACTGCACC-3′，

一步擴增出全長cDNA序列，克隆入pMD18-T載體，挑取陽性克隆進行堿基序列測定。

3.一種權利要求1所述的鷓鴣B淋巴細胞刺激因子cDNA的重組應用，是通過現有基因工程方法，生產重組鷓鴣B淋巴細胞刺激因子，作為鷓鴣類免疫增強劑。

4.鷓鴣B淋巴刺激因子，其特征在于，是SEQ?ID?NO.2所示的序列。