[發(fā)明專利]基于化學(xué)合成法的靈芝酸T及靈芝酸Me的提純方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010199508.0
• 申請日: 2010-06-13
• 公開（公告）號: CN101845074A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鐘建江;王家樂;秦漢林
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00
• 代理公司: 上海交達(dá)專利事務(wù)所 31201
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是一種中藥制備技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體是一種基于化學(xué)合成法的靈芝酸T及靈芝酸Me的提純方法。

背景技術(shù)

靈芝作為一種名貴藥材，在中國及東南亞地區(qū)有著悠久的藥用歷史。現(xiàn)代醫(yī)藥研究表明，靈芝酸是靈芝重要的活性成分之一，具有抗癌，抗HIV病毒，抗炎癥反應(yīng)等藥理功能Acta.Pharmacol.Sin.，25(11)，1387-1395，2004。近期，國際上有多個一線研究小組陸續(xù)報告單體靈芝酸的抗癌功效及相關(guān)的抗癌機制，如靈芝酸D和X等Molecule&Cell?Proteomics，7(5)，949-961，2007；Life?Sciences?77(3)，pp.252-265。其他現(xiàn)有技術(shù)也表明，靈芝酸T和Me具有顯著的抑制癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的功效Life?Science，80(3)，205-211，2006；Process?Chemistry，44(8)，928-933，2009；CN200510026378.X。這些研究工作表明了靈芝酸具有成為一種優(yōu)良的，純天然的輔助抗癌藥物的巨大潛力。然而，現(xiàn)行低產(chǎn)率的分離技術(shù)大大拖延了對其進(jìn)行系統(tǒng)性藥物開發(fā)的進(jìn)程，因此單體靈芝酸制備工藝的開發(fā)將成為今后相關(guān)藥理研究和藥物開發(fā)過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。

目前，單體靈芝酸大規(guī)模制備面臨主要難題在于：靈芝酸為一類結(jié)構(gòu)相似，含量低的靈芝次生代謝產(chǎn)物。通常，靈芝細(xì)胞粗提液中存在幾十種結(jié)構(gòu)類似的靈芝酸，且這些物質(zhì)的含量相差不大，這就給制備性分離造成了很大的不便。即使某些高含量的靈芝酸，如7-乙氧基靈芝酸O，已有了初步的大規(guī)模分離純化方案CN200910308432.8，但由于粗提液中靈芝酸種類復(fù)雜，因此該工藝的放大前景有限。同時在此類靈芝酸分離提純的廢棄洗脫液中亦存在大量各類結(jié)構(gòu)類似的靈芝酸，這些有價值的廢棄物是很難被現(xiàn)行靈芝酸分離工藝所利用。現(xiàn)在，隨著制備液相色譜，高速逆流色譜等現(xiàn)代制備分離儀器的發(fā)展和應(yīng)用，制備分離所能達(dá)到的柱效分離度有了顯著地提高，但其依然不能完全解決從中草藥提取液這類復(fù)雜體系中分離單個活性有效成分的問題，更何況，這些設(shè)備昂貴，不適合工業(yè)化大產(chǎn)生。因此，實現(xiàn)靈芝酸大規(guī)模制備的前提是建立一種簡化中靈芝酸種類復(fù)雜性的高效低耗的方法。

靈芝酸是一類羊毛甾醇型高度氧化的四環(huán)三萜酸。來源于菌絲體的靈芝酸主要可分為兩類

Ⅰ類：

Ⅱ類其母環(huán)結(jié)構(gòu)基本類似，主要區(qū)別在于：1取代基的位置和種類；2環(huán)上是否具有共軛雙鍵。因此利用化學(xué)合成法來修飾靈芝酸結(jié)構(gòu)，從而轉(zhuǎn)化和合并靈芝酸種類，估計是一種提高特定靈芝酸提取分離效率的可行策略。據(jù)報道，酸催化法能有效地使第一類靈芝酸中C7位的含氧取代基脫去，并通過電子轉(zhuǎn)移在C7，C9，C11位形成和第二類靈芝酸一致的共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，即將第一類的靈芝酸轉(zhuǎn)化成相應(yīng)結(jié)構(gòu)的第二類靈芝酸Agric.Boil.Chem.51(2)，619-622，1987。此外，菌絲體來源的靈芝酸的取代基主要為羥基和乙酰基，而靈芝酸母環(huán)結(jié)構(gòu)中又缺少可以被乙酰化的位點，因此，現(xiàn)階段急需一種通過乙酰化反應(yīng)來合并靈芝酸的取代基種類，以達(dá)到進(jìn)一步富集特定靈芝酸如靈芝酸T和靈芝酸Me的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提供一種基于化學(xué)合成法的靈芝酸T及靈芝酸Me的提純方法，采用乙酰化和酸催化兩步化學(xué)修飾，大幅簡化了靈芝菌絲體靈芝酸粗提液或以這類提取液為原料的靈芝酸分離提純的廢棄洗脫液中靈芝酸的種類和結(jié)構(gòu)。同時，由于多種靈芝酸轉(zhuǎn)化生成為靈芝酸T和靈芝酸Me，這兩種靈芝酸的含量得到顯著提高。保證了在低成本的情況下提供成分簡單，易分離純化的富含靈芝酸T和靈芝酸Me的靈芝酸粗品，滿足大規(guī)模活性靈芝酸分離制備對預(yù)處理工藝的需求。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，本發(fā)明包括以下步驟：

步驟一、將靈芝酸粗提液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)處理濃縮至浸膏狀的靈芝細(xì)胞提取浸膏。

所述的靈芝酸粗提液是指：靈芝菌絲體靈芝酸提取液或含有靈芝酸的分離提純廢棄洗脫液。

所述的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)處理是指采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，設(shè)置環(huán)境溫度為50℃以下進(jìn)行濃縮蒸發(fā)。

所述的靈芝菌絲體靈芝酸提取液是指：采用氯仿、二氯甲烷，乙酸乙酯或乙醇中的一種或其組合對靈芝菌絲體進(jìn)行靈芝酸抽提后得到的提取液。

所述的含有靈芝酸的分離提純廢棄洗脫液是指：以靈芝菌絲體靈芝酸提取液為原料，依次經(jīng)過色譜分離、膜分離和電泳分離得到靈芝酸的過程中廢棄的洗脫液。

所述的靈芝菌絲體是指兩階段靈芝發(fā)酵得到的靈芝細(xì)胞經(jīng)烘干處理后得到干燥菌絲體；

所述的靈芝細(xì)胞的獲得方式如下：