[發明專利]一種良種奶山羊多基因聚合的選育方法

無效

• 申請號: 201010199486.8
• 申請日: 2010-06-12
• 公開（公告）號: CN101845506A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 曹斌云;安小鵬;李廣;侯金星;王建剛;宋宇軒;楊明明;朱廣琴;王韻斐;崔易虹;陳秋菊
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李鄭建

1.一種良種奶山羊多基因聚合的選育方法，其特征在于，以連續產2羔及以上的奶山羊基因組DNA為模板，在PCR條件下，利用4對引物P1、P2、P3和P4，分別擴增催乳素受體基因和促黃體素beta亞基基因，其中：

所述的引物P1如下：

上游引物1F：5′-TGTCAGTAAGCGTCAGAGGGC-3′；

下游引物1R：5′-GGCTGGTGGAAGGTCACTCTT-3′；

所述的引物P2如下：

上游引物2F：5′-CTTACCACAACATTGCTGACG-3′；

下游引物2R：5′-GTTTAGCAGAGAACAAGGGGG-3′；

所述的引物P3如下：

上游引物3F：5′-CTTACCACAACATTGCTGACG-3′；

下游引物3R：5′-GTTTAGCAGAGAACAAGGGGG-3′；

所述的引物P4如下：

上游引物4F：5′-CTTACCACAACATTGCTGACG-3′；

下游引物4R：5′-GTTTAGCAGAGAACAAGGGGG-3′；

引物P1擴增催乳素受體基因內含子2，引物P2擴增催乳素受體基因外顯子10，用于篩查山羊催乳素受體基因位點的突變；

引物P3擴增促黃體素beta亞基基因5′非翻譯區，引物P4擴增促黃體素beta亞基基因外顯子1，用于篩查山羊促黃體素beta亞基基因位點的突變；

根據瓊脂糖凝膠電泳對4對引物擴增產物進行大小判定，然后采用DNA測序技術篩查到催乳素受體基因內含子2和外顯子10，以及促黃體素beta亞基基因5′非翻譯區和外顯子1共有4個堿基的突變；

再利用聚丙烯酰胺凝膠電泳對這4個位點的SNPs進行基因分型和基因頻率分析，分析高產奶山羊個體多態性與產羔數的關系及不同基因型組合與產羔數之間的關系，并上溯親代，跟蹤子代，檢測母羊個體的基因型組合與產羔數的關系，分析不同基因型在多胎性狀形成中的貢獻，挑選高產個體的基因型組合，分析高產個體基因型組合形成的選配方式，應用這些選配方式形成奶山羊多羔的多基因聚合良種核心群。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的PCR擴增的條件是：

12μL反應體系：包括0.25U?Taq?DNA聚合酶，6μL?2×Buffer，0.4μL的山羊基因組DNA樣品，10pmol/μL的各引物的上、下游引物各0.4μL和滅菌超純水4.7μL；

PCR反應程序如下：

1)利用引物P1的PCR反應程序為：95℃預變性5min，94℃變性30s，68℃退火30s，72℃延伸30s，共進行35個循環，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

2)利用引物P2的PCR反應程序為：95℃預變性5min，94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，如此進行35個循環，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

3)利用引物P3的PCR反應程序為：95℃預變性5min，94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，如此進行35個循環，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

4)利用引物P4的PCR反應程序為：95℃預變性5min，94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，如此進行35個循環，最后72℃充分延伸10min，4℃保存。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的催乳素受體基因內含子2在114bp存在C→T的突變，外顯子10在319bp存在C→A的突變；所述的黃體素beta亞基基因的5′非翻譯區在153bp存在C→A的突變，外顯子1在64bp存在T→C的突變。