[發明專利]1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯對照品的制備方法

無效

• 申請號: 201010199208.2
• 申請日: 2010-06-04
• 公開（公告）號: CN101863935A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 李霄;李澤琳;艾萍;孫媛媛;王小利
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: C07H15/203
• 分類號: C07H15/203;C07H1/08
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203
• 代理人: 張燕慧

技術領域

本發明涉及一種從中藥白及中提取分離1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯對照品的制備方法。

技術背景

中藥白及為蘭科植物白及Bletilla?striata(Thunb.)Reichb.F.的干燥塊莖，味苦、甘、澀，性微寒，具有收斂止血、消腫生肌的功效。白及不僅是常用傳統中藥，而且也廣泛用于食品添加劑和化妝品方面。

鑒于缺少對照品，即使在新頒布的2010年版《中國藥典》中，白及質量控制項下也僅有性狀、鑒別和檢查項，缺少相關指標成分的含量測定，難以精確控制其內在質量，在對中藥白及的研究中發現，1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯在中藥白及中含量較高，且在不同的產地中含量有一定差別，可以作為評價白及質量指標之一。該化合物其結構式如下：

何訊等人(HPLC測定白及中militarine含量[J].中國中藥雜志，2009，34(16)：2076-2078)測定了不同產地白及中1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯含量，認為該成分可以做為白及藥材質量控制的檢測指標，也預示該化合物做為白及含量測定的對照品具有潛在需求。韓廣軒等人(中藥白及化學成分研究(II)[J].第二軍醫大學學報，2002，23(9)：1029-1031)采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，反復硅膠柱層析，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯。但是該方法是對白及化學成分的系統分離，不適合于針對1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯的分離制備。而針對1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯進行分離的方法尚未見文獻報道。

發明內容

本發明的目的是為了解決中藥白及質量控制中含量測定所需對照品，提供一種從中藥白及中提取分離1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯對照品的方法。

本發明所提供的一種1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯對照品的制備方法，包括以下步驟：

(1)將白及藥材粉碎成粗粉，按照白及粗粉∶溶劑＝1∶4～20(重量)的比例，回流提取1～8小時，濾液回收溶劑，得到流浸膏，其中所述溶劑為甲醇或乙醇，濃度為30～80％；

(2)將上述白及流浸膏加水稀釋，白及流浸膏∶水＝1∶4～10(重量)，稀釋液經大孔吸附樹脂柱富集，以20～80％乙醇為解吸附劑進行洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，得到濃縮液，加硅膠混合均勻，硅膠加入量按白及粗粉∶硅膠＝1∶0.02～0.1(重量)計，室溫干燥，得到干燥粉末；

(3)將上述干燥粉末轉入層析柱，依次以不同比例氯仿-甲醇為洗脫劑進行洗脫，氯仿∶甲醇＝1∶0～0.2、1∶0.2～0.4、1∶0.5～0.9(體積)，依次收集洗脫液，薄層層析檢識，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯組分，回收溶劑，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯粗品；

(4)將上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯粗品進行凝膠柱層析，甲醇或水為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液，薄層層析檢識，合并1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯組分，回收溶劑，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯精品；

(5)將上述1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯精品進行反相硅膠柱層析，以甲醇-水洗脫，甲醇占水的30～70％(體積)，收集洗脫液，經高效液相檢測，將純度≥98％的1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯組分合并，回收溶劑，得到1，4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯對照品。

上述步驟(1)中的白及藥材選自蘭科植物白及Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.的干燥塊莖。

上述步驟(2)中所述大孔吸附樹脂為非極性或弱極性大孔吸附樹脂，優選型號為D101或AB-8型大孔吸附樹脂。

上述步驟(3)和步驟(4)中薄層層析的顯色條件為10％硫酸乙醇溶液，105℃下加熱顯色。

上述步驟(4)中所述凝膠為葡聚糖凝膠或羥丙基葡聚糖凝膠，優選型號為Sephadex?G-25或Sephadex?LH-20型凝膠。

上述步驟(5)中所述反相硅膠優選型號為C8或C18型反相硅膠。

上述步驟(5)中高效液相檢測條件：流動相為24％乙腈-水，檢測波長為222nm。

本發明方法與現有技術相比具有以下有益效果：