[發(fā)明專利]檢測(cè)山羊生長(zhǎng)激素基因編碼區(qū)5個(gè)堿基突變多態(tài)性的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010199157.3
• 申請(qǐng)日: 2010-06-12
• 公開（公告）號(hào): CN101928774A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹斌云;安小鵬;侯金星;王利心;王建剛;宋宇軒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 西安恒泰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61216
• 代理人: 李鄭建

1.一種檢測(cè)山羊生長(zhǎng)激素基因編碼區(qū)5個(gè)堿基突變多態(tài)性的方法，其特征在于，該方法以山羊基因組DNA為模板，在Taq?DNA聚合酶、緩沖環(huán)境、Mg²⁺、dNTPs存在的情況下，利用兩對(duì)引物P1和P2，在PCR條件下進(jìn)行擴(kuò)增，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增目的片段大小，采用DNA測(cè)序技術(shù)篩查山羊生長(zhǎng)激素基因編碼區(qū)5個(gè)堿基的突變點(diǎn)，然后對(duì)生長(zhǎng)激素基因的SNPs進(jìn)行基因分型和基因頻率分析，同時(shí)分析不同基因型與布爾山羊、布爾山羊和關(guān)中奶山羊的雜交后代3月齡的生長(zhǎng)性狀之間關(guān)系；

所述的兩對(duì)引物P1和P2分別如下：

引物P1：

上游引物1F：5'-TAGAAATGGGGGTGTGTGGGGT-3'；

下游引物1R：5'-CATCCTCCACTGCCATCCAACA-3'；

引物P2：

上游引物2F：5'-TAGGGGAGGGTGGAAAATGGA-3'；

下游引物2R：5'-TCTAGGAAGGCACGGGGAGG-3'。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增的條件是：

25μL反應(yīng)體系：包括0.5U?Taq?DNA聚合酶，12.5μL?2×Buffer，0.3μL的山羊基因組DNA樣品，10?pmol/μL引物P1和P2的上、下游引物各0.3μL和滅菌超純水11.4μL；

PCR反應(yīng)程序如下：

（1）利用引物P1的PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，66℃退火30s，72℃延伸40s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后72℃充分延伸10min，得到擴(kuò)增片段，4℃保存；

（2）利用引物P2的PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，65℃退火30s，72℃延伸40s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后72℃充分延伸10min，得到擴(kuò)增片段，4℃保存。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的山羊生長(zhǎng)激素基因編碼區(qū)5個(gè)堿基突變點(diǎn)分別位于山羊生長(zhǎng)激素基因外顯子3的第112bp、第142bp、第214bp以及山羊生長(zhǎng)激素基因外顯子4的第214bp和第266bp。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生長(zhǎng)激素基因的SNPs基因分型是用10%聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)和分析利用引物P1擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物，結(jié)果如下：純合型AA在第112bp、第142bp和第214bp位的堿基是A、C和C，雜合型AB在第112bp和第142bp位的堿基是G/A和T/C，雜合型AC在第214bp位的堿基是T/C；同樣用10%聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)和分析利用引物P2擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物，結(jié)果如下：純合型EE在第214bp和第266bp位的堿基是C和C，雜合型EF在第214bp位的堿基是T/C，雜合型EG在第266bp位的堿基是A/C。