[發(fā)明專利]一種檢測并殖吸蟲病的診斷試劑盒及其制備方法

無效

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• 申請日: 2010-06-10
• 公開（公告）號: CN102279259A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設計）人: 陳韶紅;陳家旭;李浩;周曉農;張永年;郭儉
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/531;G01N21/78
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司 31128
• 代理人: 嚴新德

技術領域：

本發(fā)明屬于生物技術領域，尤其涉及一種試劑盒及其制備方法，具體來說是一種檢測并殖吸蟲病的診斷試劑盒及其制備方法。

背景技術：

并殖吸蟲病(肺吸蟲病)是一種危害人體健康的食源性寄生蟲病。在中國發(fā)現(xiàn)已有125年的歷史。首例是Ringer在臺灣葡籍水兵肺中發(fā)現(xiàn)。目前世界上報告的蟲種已有50余種，其中我國各地報告有28種之多，而且在我國的二十多個省(區(qū))陸續(xù)發(fā)現(xiàn)有本病的報告。近年來，隨著改革開放的深入，由于人口的流動，人們飲食結構的改變，并殖吸蟲病人出現(xiàn)由農村向城市蔓延的趨勢，并殖吸蟲病成為我國主要的寄生蟲病之一。但由于并殖吸蟲病臨床表現(xiàn)的多樣性與復雜性，誤診、誤治的情況時有發(fā)生。

以往對于并殖吸蟲引起的并殖吸蟲病診斷主要是痰液或糞便中找到蟲卵，但顯微鏡檢查往往需要有經驗的專門人員操作，且費時、耗力。尤其是有些并殖吸蟲如斯氏并殖吸蟲，異盤并殖吸蟲等引起的肺外型并殖吸蟲病則很少或不能查到蟲卵，使傳統(tǒng)的診斷方法受到了嚴峻的挑戰(zhàn)。

近幾年來血清免疫學方法應用于并殖吸蟲病的診斷取得了可喜的結果。目前臨床上常用的并殖吸蟲病血清學診斷方法主要是檢測血清內特異性抗體，主要檢測方法有：酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)；間接血凝試驗(IHA)，對流免疫電泳法(CIE)來檢測并殖吸蟲病患者血清內特異性抗體，但抗體檢測方法經常發(fā)現(xiàn)會與肺部腫瘤及其他吸蟲病有交叉假陽性反應。因此，研制開發(fā)并殖吸蟲病循環(huán)抗原的檢測(CAg)具有十分重要意義，并可用此法取代目前檢測抗體無法進行早期診斷及臨床療效考核預后判定之弊端。

馮笑川等應用抗衛(wèi)氏并殖吸蟲成蟲IgG的雙抗體夾心ELISA檢測58例并殖吸蟲病患者治療前后的血清特異性循環(huán)抗原，轉陰率達100％，而檢測抗體的轉陰率僅48％，證明檢測循環(huán)抗原可考核療效，優(yōu)于檢測抗體。

發(fā)明內容：

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測并殖吸蟲病的診斷試劑盒及其制備方法，所述的這種檢測并殖吸蟲病的診斷試劑盒及其制備方法要解決現(xiàn)有技術中檢測并殖吸蟲病的方法費時、耗力而且不準確的技術問題。

本發(fā)明提供了一種檢測并殖吸蟲病的診斷試劑盒，含有兔抗衛(wèi)氏并殖吸蟲成蟲可溶性抗原的多克隆抗體(兔抗-PW-IgG)、酶標記的兔抗衛(wèi)氏并殖吸蟲成蟲可溶性抗原的多克隆抗體(HRP-PW-IgG)、硝酸纖維薄膜、小牛血清白蛋白的PBST溶液、PBST洗滌液、底物顯色液(A液、B液、C液)、陽性對照樣本、陰性對照樣本、聚乙烯反應板。

進一步的，聚乙烯反應板采用96孔聚乙烯反應板。

進一步的，所述的小牛血清白蛋白的PBST溶液由小牛血清白蛋白和PBST洗滌液組成，所述的小牛血清白蛋白和PBST洗滌液的重量比為：1∶99。

進一步的，所述的PBST洗滌液由氯化鈉、KH₂PO₄、Na₂HPO₄、KCl、吐溫-20和水組成，在配制PBST洗滌液的過程中，包括一個先配制基液的步驟，所述的基液由氯化鈉、KH₂PO₄、Na₂HPO₄、KCl和水組成，所述的氯化鈉在所述的基液中的重量百分比為0.8％，所述的KH₂PO₄在所述的基液的重量百分比為0.02％，所述的Na₂HPO₄在所述的基液中的重量百分比為0.29％，所述的KCl在所述的基液中的重量百分比為0.02％，余量為水，基液配制完成后，再加入吐溫-20，每100ml中加入0.5ml吐溫-20，所述的PBST洗滌液的pH值為7.4。