[發明專利]一種真菌快速培養鑒定藥敏試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201010197602.2
• 申請日: 2010-06-11
• 公開（公告）號: CN101886111A
• 公開（公告）日: 2010-11-17
• 發明（設計）人: 王則宇;鄭業煥;張中洲;胡澤林;閆瑞亮;楊靜靜;楊紅云;付光宇;吳學煒
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖綠科生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/20
• 分類號: C12Q1/20;C12Q1/04
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

技術領域

本發明屬于體外診斷技術領域，尤其是涉及一種真菌快速培養鑒定藥敏試劑盒，本發明還涉及使用該試劑盒進行檢測的方法。

背景技術

真菌(fungus)原歸屬植物界，現代分類系統則將其單立為一界。真菌與細菌不同，具有真正的核膜，能產生孢子，沒有葉綠素，產生分枝的菌絲，細胞壁有甲殼質或纖維素。臨床上將致病性真菌分為淺部真菌和深部真菌兩類，前者侵犯皮膚、毛發、指甲，對治療有頑固性，但對身體影響較小。后者可侵犯全身內臟，嚴重者可引起死亡。深部真菌是侵犯皮下組織和內臟，引起全身性感染的真菌，這類真菌主要是念珠菌屬和新型隱球菌屬。念珠菌屬廣泛存在于自然界中，大約150個種，是一種條件致病菌，臨床上最常見的致病念珠菌感染包括：白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌和其他念珠菌。正常機體中念珠菌的少量存在不引起疾病，當機體免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制約作用失調，則本菌大量繁殖并改變生長形式(芽生菌絲相)侵入細胞引起疾病。可引起：皮膚念珠菌病；黏膜念珠菌病；內臟及中樞神經念珠菌病，可由黏膜皮膚等處病菌播散引起，如肺炎、腸胃炎、心內膜炎、腦炎等，偶爾也可發生敗血癥。新型隱球菌對于人類而言為條件致病菌，本菌多由呼吸道轉入，在肺部引起輕度炎癥，或隱性傳染，也可由受損皮膚及腸道傳入，當機體免疫功能下降時可向全身播散，主要侵犯中樞神經系統，發生腦膜炎、腦炎、腦肉芽腫等，也可入侵骨骼、肌肉、淋巴結、皮膚黏膜，引起慢性炎癥和膿腫。如隱球菌腦膜炎在使用二性霉素B之前，病死率高達90％以上。

目前進行真菌檢測的方法主要是培養方法，而鑒定和藥敏均需要先進行分離培養，然后再進行鑒定和藥敏，而直接用臨床標本進行鑒定和藥敏的試劑盒卻幾乎沒有。臨床真菌的診斷通常是：先用平板培養1-3天進行純化培養，然后通過變色平板或全自動儀器進行鑒定，然后再通過MH平板紙片法分析其抗生素敏感情況，其前后診斷時間一般在4天以上，對操作人員要求高，并且麻煩，費時費力，成本高，不適合臨床的快速診斷治療，容易貽誤病情。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術存在的不足，提供一種同時對多種真菌進行快速有效鑒定和藥敏檢測的真菌快速培養鑒定藥敏試劑盒，本發明還同時提供使用該試劑盒直接對臨床標本進行檢測的方法。

為實現上述目的，本發明可采取下述技術方案：

本發明所述的真菌快速培養鑒定藥敏試劑盒，包括帶有培養液、稀釋液、礦物油和檢測板的盒體，所述培養液中含有0.05-2％的酵母膏，0.05-2％的磷酸二氫鉀，0.05-2％硫酸鎂，0.1-2％的NaCl，0.05-2％的硫酸銨，0.001％的萬古霉素，0.01-0.08％的氯霉素，0.001％的多粘菌素B，0.005-0.02％溴甲酚紫；所述檢測板上設置有陰性參照孔，陽性檢測孔，真菌鑒定孔和抗生素藥敏檢測孔；所述稀釋液采用0.5-1％的氯化鈉溶液，所述礦物油為液體石蠟油。

所述真菌鑒定孔至少包含有白色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新型隱球菌中一種以上的真菌鑒定孔。

所述白色念珠菌鑒定孔中包被有5-40g/l的葡萄糖和100mg/l的放線菌酮；熱帶念珠菌鑒定孔中包被有5-40g/l松三糖和1mg/l的氟康唑；克柔念珠菌鑒定孔中包被有5-40g/l乳糖，20mg/l的氟康唑；光滑念珠菌鑒定孔中包被有5-50g/l海藻糖，1mg/l的伏立康唑；季也蒙念珠菌鑒定孔中包被有5-40g/l的棉子糖；新型隱球菌鑒定孔中包被有5-40g/l的葡萄糖和0.013mg/l的卡泊芬凈。每孔的包被量為100ul。

所述藥敏檢測孔至少包含有5-氟胞嘧啶、兩性霉素、制霉菌素、伊曲康唑、伏立康唑、克霉唑、咪康唑、酮康唑、益康唑、氟康唑抗生素中三種以上的藥敏檢測測定孔。

所述抗生素高低濃度孔中對應包被濃度分別是：5-氟胞嘧啶：4mg/l和32mg/l；兩性霉素：1mg/l和2mg/l；制霉菌素：4mg/l和8mg/l；伊曲康唑：0.125mg/l和1mg/l；伏立康唑：1mg/l和2mg/l；克霉唑：2mg/l和8mg/l；咪康唑：1mg/l和8mg/l；酮康唑：1mg/l和8mg/l；益康唑：1mg/l和8mg/l；氟康唑：8mg/l和32mg/l。每孔的包被量為100ul。

所述陽性檢測孔包被有0.5-5％葡萄糖；每孔的包被量為100ul。

本發明真菌快速培養鑒定藥敏試劑盒的檢測方法，包括下述步驟：

(1)取取培養液50-100ul加入檢測板上的陰性參照孔中；