[發明專利]lspD抑制劑篩選模型及IspD抑制劑杜米芬的新用途

有效

• 申請號: 201010196922.6
• 申請日: 2010-06-10
• 公開（公告）號: CN102277411A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 肖春玲;高鵬;楊延輝;熊小椒;關艷;甘茂羅;郝雪秦;劉憶霜
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫藥生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;G01N21/31;A61K31/14;A61P31/06
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 程泳

1.用于2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶抑制劑篩選的試劑組，包括2-甲基-赤蘚糖醇磷酸、三磷酸胞苷和2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶。

2.根據權利要求1所述的試劑組，還包括酶反應緩沖液和離子試劑，其中所述離子試劑包括MgCl₂、NaF及DTT。

3.根據權利要求1所述的試劑組，還包括測定2-甲基-赤蘚糖醇磷酸、三磷酸胞苷和2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶反應所生成的焦磷酸的試劑，所述試劑優選為β-巰基乙醇和鉬酸銨。

4.根據權利要求1所述的試劑組，其中所述2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶是從能夠產生2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶的生物中提取獲得的或者根據前述生物的基因組序列利用分子生物學方法獲得的。

5.使用權利要求1-4所述的試劑組篩選2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶抑制劑的方法，包括以下步驟：

a.將三磷酸胞苷、2-甲基-赤蘚糖醇磷酸、2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶、待篩選化合物、酶反應緩沖液和離子試劑混合，組成反應體系，孵育，同時設立陽性對照和陰性對照組；

b.測定a反應中所生成的焦磷酸的量，得出2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶活性；優選為加入β-巰基乙醇和鉬酸銨，孵育，檢測反應體系的光吸收值，得出2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶活性；

c.根據光吸收值計算待篩選化合物對2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶活性的抑制率，進而得到對2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶活性有抑制作用的陽性化合物。

6.根據權利要求5所述的方法，其中各化合物的反應終濃度分別為2-甲基-赤蘚糖醇磷酸100μM-1mM，三磷酸胞苷100μM-1mM，2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶3.85-385pmol，待篩選化合物1-100μg/ml；優選的濃度為2-甲基-赤蘚糖醇磷酸250μM，三磷酸胞苷500μM，2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶38.5pmol，待篩選化合物10μg/ml。

7.根據權利要求5所述的方法，其中所述陽性對照組是指反應體系中加入失活的2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶，不加待篩選化合物；其中所述陰性對照組是指反應體系中不加入待篩選化合物。

8.根據權利要求5所述的方法，其中所述根據光吸收值計算抑制率的方法如式(I)所示：

9.杜米芬在體內/體外抑制分枝桿菌的用途，所述分枝桿菌優選為結核分枝桿菌，最優選為結核分枝桿菌H₃₇Rv。

10.杜米芬用于制備抗結核藥物的用途。

11.2-C-甲基-D-赤蘚糖醇-4-磷酸胞嘧啶轉移酶在制備用于篩選結核抑制劑的組合物中的用途。