[發明專利]一種與PHBV的3-HV單體合成相關的β-酮硫解酶及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201010195738.X
• 申請日: 2010-06-01
• 公開（公告）號: CN102268424A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 向華;馮博;韓靜
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12P7/62;C12P7/42;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種蛋白質，是如下1)或2)的蛋白質：

1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

2)將序列1的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與聚羥基丁酸羥基戊酸酯合成和/或3-羥基脂肪酸合成相關的由1)衍生的蛋白質。

2.權利要求1所述蛋白的編碼基因。

3.根據權利要求1或2所述編碼基因，其特征在于：所述編碼基因為如下1)、2)、3)或4)的所示的基因：

1)序列表中序列2自5’末端第955-2106位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2自5’末端第791-2119位核苷酸所示的DNA分子；

3)在嚴格條件下與1)或2)限定的DNA分子雜交且與聚羥基丁酸羥基戊酸酯的合成和/或3-羥基脂肪酸的合成相關的DNA分子；

4)與1)或2)限定的DNA序列至少具有90％同源性且編碼與聚羥基丁酸羥基戊酸酯合成和/或3-羥基脂肪酸合成相關蛋白的DNA分子。

4.含有權利要求2或3所述編碼基因的重組載體、轉基因細胞系和重組菌；含有權利要求2或3所述編碼基因的菌。

5.根據權利要求4所述的重組載體或重組菌，其特征在于：所述重組載體為在載體pWL102的多克隆位點插入權利要求2或3所述編碼基因得到的重組載體；所述重組菌為將權利要求2或3所述編碼基因導入宿主菌得到的重組菌。

6.根據權利要求4所述的菌，其特征在于：所述含有權利要求2或3所述編碼基因的菌為極端嗜鹽古菌(Haloferax?sp.)XH1001?CGMCC?No.3822。

7.根據權利要求4所述的重組菌，其特征在于：所宿主菌為極端嗜鹽古菌，優選為極端嗜鹽古菌(Haloarcula?hispanica)或極端嗜鹽古菌(Haloferax?mediterranei)，尤其優選為極端嗜鹽古菌(Haloarcula?hispanica)CGMCC?No.1.2049。

8.權利要求1所述蛋白在合成聚羥基丁酸羥基戊酸酯和/或3-羥基戊酸中的應用，或權利要求2或3所述編碼基因在合成聚羥基丁酸羥基戊酸酯和/或3-羥基戊酸中的應用。

9.一種制備聚羥基丁酸羥基戊酸酯的方法，發酵權利要求4或7所述重組菌，得到聚羥基丁酸羥基戊酸酯，所述聚羥基丁酸羥基戊酸酯中3-羥基脂肪酸的摩爾百分比高于發酵所述宿主菌得到的聚羥基丁酸羥基戊酸酯中3-羥基脂肪酸的的摩爾百分比。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于：所述發酵的方法為：1)將所述重組菌接種于AS-168培養基，在37℃培養至對數生長期，得到對數期菌株；每升AS-168培養基按如下方法配制：將5.0g酸水解酪素，5.0g酵母提取物，1.0g谷氨酸鈉，3.0g檸檬酸鈉，200g?NaCl，20g?MgSO₄·7H₂O，2.0g?KCl，0.36g?FeSO₄·4H₂O和0.36mg?MnCl₂·4H₂O溶于水中，用水補足體積；所述AS-168培養基的pH值為7.2；

2)再將所述對數期菌株接種到MG培養基，在37℃培養3天，得到聚羥基丁酸羥基戊酸酯；每升所述MG培養基按如下方法配制：將200g?NaCl，20g?MgSO₄·7H₂O，2.0g?KCl，1g谷氨酸鈉，37.5mg?KH₂PO₄，50mg?FeSO₄·7H₂O，0.36mg?MnCl₂·4H₂O，1g酵母提取物和20g葡萄糖溶于水中，用水補足體積；所述MG培養基的pH值為7.2。