[發明專利]一種培養金龜子綠僵菌的方法

無效

• 申請號: 201010195687.0
• 申請日: 2010-06-01
• 公開（公告）號: CN101845397A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 黃俊生;梁昌聰;楊臘英;代鵬;黃志;劉磊;王國芬;謝玉萍
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院環境與植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種培養金龜子綠僵菌的方法。

背景技術

化學農藥的大量使用對環境生態造成了嚴重的影響，生物防治日益被人們所重視，利用昆蟲病原微生物防治害蟲是生物防治的重要手段之一。蟲生真菌種類多，代謝類型復雜，以其安全有效，顯著的流行潛力，容易大量生產等優點，在害蟲的生物防治中占有越來越重要的地位。綠僵菌是世界性分布的殺蟲真菌，能寄生8個目30個科約200種昆蟲、螨類及線蟲。利用綠僵菌防治害蟲的研究已有百年，它致病力強、效果好，對人、畜、作物及害蟲天敵無毒害，是當今用于生物防治的蟲生真菌研究的主要對象之一。

目前，對金龜子綠僵菌的培養方法一般都生產周期長、菌劑含孢量低、成本高，阻礙了對金龜子綠僵菌的生產進程。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種培養金龜子綠僵菌(Metarhizium?anisopliae)的方法。

本發明所提供的培養金龜子綠僵菌(Metarhizium?anisopliae)的方法，包括如下步驟：1)用液體培養基對金龜子綠僵菌(Metarhizium?anisopliae)進行液體發酵培養，將容器內的所有物質記作液體發酵產物；2)將所述液體發酵產物接種于固體發酵培養基，進行固體發酵培養，得到金龜子綠僵菌。

上述方法中，所述步驟1)中，所述液體發酵培養的條件為：溫度為28℃，通入空氣的量為10L/min/35L所述液體培養基和所述容器內的氣壓為0.03Mpa。

上述方法中，所述步驟1)中，液體發酵培養至液體發酵產物呈如下狀態：液體發酵產物中有菌絲及液生孢子，液體發酵產物中菌絲體中無液泡，液體發酵產物中無斷裂的菌絲。

上述方法中，所述步驟1)中，液體發酵培養的時間為65小時～72小時，具體為65小時、68小時或72小時。

上述方法中，所述步驟1)中，所述液體培養基由玉米粉、豆餅粉、蛋白胨、KH₂PO₄、MgSO₄、KCl、FeSO₄·7H₂O和水組成；所述各組分的配比為：20g玉米粉∶40g豆餅粉∶2.5g蛋白胨∶0.5gKH₂PO₄∶0.5gMgSO₄∶0.5gKCl∶0.01gFeSO₄·7H₂O∶1000ml水。

上述方法中，所述步驟2)中，所述固體發酵培養的方式按照如下a階段、b階段和c階段依次進行：

a階段：在溫度為24℃、濕度為95％(體積百分含量)的條件下培養；

b階段：在溫度為28℃、濕度為80％(體積百分含量)的條件下培養；

c階段：在溫度為28℃、濕度為40％(體積百分含量)的條件下培養。

上述方法中，所述步驟2)中，所述a階段的培養時間為2天-3天；所述b階段的培養時間為2天；所述c階段的培養時間為2天。

上述方法中，所述步驟2)中，所述接種的量為：使所述液體發酵產物與固體發酵培養基的體積比為20∶80。

上述方法中，所述步驟2)中，所述固體發酵培養基由甘蔗渣、麩皮、玉米粉、KH₂PO₄、MgSO₄、KCl和水組成；所述各組分的質量份數比為：300-400份甘蔗渣∶150-200份麩皮∶90-150份玉米粉∶0.5份KH₂PO₄∶0.5份MgSO₄∶0.5份KCl∶300-400份水；

所述各組分的質量份數比具體為：300份甘蔗渣∶150份麩皮∶150份玉米粉∶0.5份KH₂PO₄∶0.5份MgSO₄∶0.5份KCl∶300份水，或350份甘蔗渣∶180份麩皮∶120份玉米粉∶0.5份KH₂PO₄∶0.5份MgSO₄∶0.5份KCl∶350份水，或400份甘蔗渣∶200份麩皮∶90份玉米粉∶0.5份KH₂PO₄∶0.5份MgSO₄∶0.5份KCl∶400份水。

上述方法中，所述麩皮為小麥麩皮。

上述方法中，所述步驟2)中，所述培養過程中包括翻料的步驟。