[發明專利]猴泡沫病毒的實時熒光定量PCR檢測方法及試劑盒

無效

• 申請號: 201010194768.9
• 申請日: 2010-05-28
• 公開（公告）號: CN101831510A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 賀爭鳴;栗景蕊;付瑞;李曉波
• 申請（專利權）人: 中國藥品生物制品檢定所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64;C12N15/11
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

技術領域

本發明涉及生物技術領域中病毒的分子生物學檢測方法，特別是涉及猴泡沫病毒的實時熒光定量PCR檢測方法及試劑盒。

背景技術

猴泡沫病毒(Simina?Foamy?Viruses，SFV)的傳染源主要為大猩猩、非洲大狒狒、長尾猴，主要存在于非洲、美洲和亞洲，在經常接觸非人靈長類(non-human?primates，NHPs)人群中的傳播時有發生。SFV通過體液進行傳播，可以遺傳給后代。動物工作者中，SFV感染比猴免疫缺陷病毒(SIV)感染更為普遍，而且潛伏期較長。SFV雖然不會對靈長類動物致病，但在物種間的傳播會引起致病性的改變，SFV的感染對人類來說意義重大。SFV的致病性研究一直受到各國學者的關注，有學者認為其有可能對人類致病，也有報道其不明顯的致病作用使得SFV成為逆轉錄病毒基因轉移載體而被用于基因治療。近來有研究人員提出病毒從靈長類動物傳染給人的頻率要比原先預想的高。因此，對SFV的研究越來越受到專家們的高度重視。

Wolfe等人對喀麥隆9個叢林地區的1100名獵人進行篩查時，在接觸過大猩猩、非洲大狒狒和長尾猴等動物體液的10個人的血液中發現一種病毒抗體。由于這種病毒和艾滋病病毒非常相似，傳染途徑也和艾滋病病毒類似，有專家稱其為“準艾滋病病毒”。Wolfe通過分析比較感染者血液中的病毒基因組序列，發現“準艾滋病病毒”是一種猴泡沫病毒，并第一次證明這種逆轉錄病毒可以傳染給人類，而且在人類宿主中能持續存在(Wolfe?ND，Switzer?WM，Carr?JK，etal.Naturally?acquired?simianretrovirus?infections?in?central?African?hunters.Lancet，2004，363：932937.)。

SFV屬于逆轉錄病毒科(Retrovidae)，泡沫病毒亞科(Spumavirinae)。泡沫病毒(Foamy?Virus，FV)有11個血清型，而感染恒河猴的主要是1型猴泡沫病毒(SFV-1)。現已在幾種靈長類動物體內分離到SFV，包括SFV-1型、SFV-3型、SFV-6型和黑猩猩的猴泡沫病毒(SFVcpz)。

SFV為單正鏈RNA病毒，是迄今發現的基因組最長的逆轉錄病毒。SFV-1、SFV-3基因組RNA分別為11.52kb、11.62kb，前病毒eDNA為12-13kb。其基因組結構為兩端為長末端重復序列(LTR)，中間部分有gag、pol、env三個結構基因，從5′端到3′端以gag-pol-env二聚體形式裝配在病毒粒子中。其中，pol編碼逆轉錄酶，gag編碼病毒殼蛋白，env編碼囊膜糖蛋白。

加強實驗用猴和猴源性生物制品的病毒檢測不僅可以保證疫苗等生物制品的安全性，同時也減少了人類的逆轉錄病毒感染率。目前，國內外一系列高敏感性的檢測方法已用于檢測動物SFV的感染狀況，以及分析猴源性生物制品(如減毒活疫苗)的SFV污染情況。PCR技術由于其快速、安全且具有較高敏感性和特異性等優點被廣泛應用。任麗虹等人建立了猴血中SFV基因PCR檢測方法(任麗虹，白巍，林凌.猴血中SFV病毒基因PCR檢測方法的建立及應用.中國病毒學，2001，16(2)：179-182.)。李華等在評價脊髓灰質炎減毒活疫苗的安全性中，用RT-PCR結合PCR方法對生產用的毒種、半成品及成品糖丸疫苗進行了檢測，對保證疫苗的安全具有重要意義(李華，胡凝珠，謝忠平等.脊髓灰質炎減毒活疫苗中SV40和泡沫病毒的檢測.中國生物制品學雜志，2004，17(4)：229-232.)。