[發明專利]猴泡沫病毒的實時熒光定量PCR檢測方法及試劑盒

無效

• 申請號: 201010194768.9
• 申請日: 2010-05-28
• 公開（公告）號: CN101831510A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 賀爭鳴;栗景蕊;付瑞;李曉波
• 申請（專利權）人: 中國藥品生物制品檢定所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64;C12N15/11
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.用于對猴泡沫病毒進行實時熒光定量PCR檢測的引物和TaqMan探針，是根據SFV?pol基因的保守區域設計的，用以定量檢測猴淋巴細胞或相關生物制品中SFV的核酸拷貝數。

2.根據權利要求1所述的引物和TaqMan探針，其特征在于：所述引物的上游引物具有序列表中SEQ?ID?NO：1的核苷酸序列，下游引物具有序列表中SEQ?ID?NO：2的核苷酸序列；所述TaqMan探針具有序列表中SEQ?ID?NO：3的核苷酸序列。

3.根據權利要求2所述的引物和TaqMan探針，其特征在于：所述TaqMan探針為經過熒光標記的，其5’端標記有報告熒光基團，3’端標記有淬滅熒光基團。

4.根據權利要求3所述的引物和TaqMan探針，其特征在于：所述報告熒光基團為FAM，熒光淬滅基團為NFQ。

5.一種猴泡沫病毒的實時熒光定量PCR檢測方法，是以權利要求1-4任一項所述的引物和TaqMan探針進行的實時熒光定量PCR檢測方法。

6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：所述20ul?PCR反應體系包括：TaqMan探針+引物1ul(TaqMan探針濃度250nM，上、下游引物濃度各為900nM)，Rnase?0.5ul，RNA?6ul(26.17μg/mL)，無RNA酶水2.5ul，Mix?10ul。

7.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：所述PCR反應條件為：先48℃反轉錄30min；然后95℃預變性10min；最后95℃15s，60℃?1min，共40個循環，在每個循環的延伸結束時進行熒光信號檢測。

8.根據權利要求5或6或7所述的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法還包括標準曲線的建立，方法為：用含有目的片段的質粒作為標準品，將其10倍系列稀釋成1.0×10^-7、1.0×10^-6、1.0×10^-5、1.0×10^-4、1.0×10^-3、1.0×10^-2、1.0×10^-1，將質粒作為模板進行實時熒光定量PCR檢測，得到用于猴泡沫病毒檢測的標準曲線。

9.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于：所述標準曲線的20ul?PCR反應體系包括TaqMan探針+引物1ul(TaqMan探針濃度250nM，上、下游引物濃度各為900nM)，Rnase?0.5ul，質粒DNA?1ul(27.4mg/mL)，無RNA酶水7.5ul，Mix?10ul；PCR反應條件與權利要求7相同。

10.一種用于對猴泡沫病毒進行實時熒光定量PCR檢測的試劑盒，包括權利要求1-4任一項所述用于對猴泡沫病毒進行實時熒光定量PCR檢測的引物和TaqMan探針。