[發明專利]一種東北虎腸道益生菌群的制備方法

無效

• 申請號: 201010194464.2
• 申請日: 2010-06-08
• 公開（公告）號: CN101869219A
• 公開（公告）日: 2010-10-27
• 發明（設計）人: 邢明偉;韓建春;曾祥偉;柴洪亮
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: A23K1/18
• 分類號: A23K1/18;A23K1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

(一)技術領域

本發明涉及一種東北虎腸道益生菌群的制備方法，屬生物工程領域。

(二)背景技術

近幾十年來，由于人類活動對環境的造成棲息地破碎化和食物短缺，以及人類的非法盜獵、撲殺和貿易造成野生東北虎生種群數量急劇下降，東北虎已被列入中國I級保護動物并被列入瀕危野生動植物種。目前在我國各種類型的動物園有120多家其中約有40多家有東北虎。尤其是以黑龍江東北虎林園、廣西桂林雄森熊虎山莊等代表的大型貓科動物繁殖基地為東北虎動物種群的擴大作出了巨大貢獻，已有的圈養東北虎種群將成為野生種群擴大發展的重要后備力量。

但隨著東北虎種群數量的增加和飼養密度的加大，一些危害嚴重的傳染病發生的機會也隨之增加。尤其是東北虎幼仔，抵抗力較差，常發生大腸桿菌、魏氏梭菌、細小病毒感染等消化道疾病，極大地降低了幼虎的成活率。我們研究認為，正常條件下，幼齡東北虎腸道內一般都存在正常菌群。菌群之間靠相互制約來維持相對平衡，正常菌群中的細菌一般對虎不致病，相反，有些細菌對虎體具有益生的生理作用。例如雙歧桿菌菌體代謝產生多種維生素，可促進虎體的生長發育。然而，由于幼虎的抵抗力較差，各種應急反應和大量使用抗生素治療疾病時，都極易導致腸道內的正常菌群失調，導致一些消化道傳染病的發生。應用了微生態制劑后，逐步恢復了腸道內正常菌群，改善了胃腸功能，提高了食物消化率，抑制了腸道腐敗菌生長、增強了機體免疫力。

本發明采用5株腸道益生菌為出發菌株，經過體外包埋后制成微生態菌劑，添加于飼料中東北虎幼崽，1年多來的反饋情況表明，飼喂后幼虎的消化道疾病發生明顯減少，幼虎的成活率明顯提高。

(三)發明內容

本發明目的在于提供一種東北虎腸道益生菌群的制備方法。

本發明的目的是這樣實現的：本發明中所涉及的百分比除另有注明之外為質量比，本發明的產品采用這樣的方法來制備的：

1.益生菌的選擇及培養基的制備

A菌——嗜酸乳桿菌CICC6074(Lactobacillus?acidophilus)，培養基為：蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母浸膏5克，葡萄糖20克，磷酸氫二鉀2克，醋酸鈉5克，檸檬酸銨2克，硫酸鎂0.2克，硫酸錳0.2克，吐溫801毫升，水1000毫升，pH6.2-6.6。

B菌——植物乳桿菌CICC6002(Lactobacillus?plantarum)5°Bé麥芽汁中加入酵母膏0.5，無菌碳酸鈣0.6。

C菌——乳酸乳球菌CICC23610(Lactobacillus?lactis)蛋白胨10克，牛肉膏10克，酵母浸膏5克，葡萄糖20克，磷酸氫二鉀2克，醋酸鈉5克，檸檬酸銨2克，硫酸鎂0.2克，硫酸錳0.2克，吐溫801毫升，水1000毫升，瓊脂1.5～2.0％，pH6.2-6.6。

D菌——鼠李糖乳桿菌CICC6001(Lactobacillus?rhamnosus)5°Bé麥芽汁中加入酵母膏0.5，無菌碳酸鈣0.6。

E菌——兩歧雙歧桿菌CICC6168(Bifidobacterium?bifidum)

酪蛋白胨10g，肉湯提取物5g，酵母提取物5g，大豆蛋白胨5g，葡萄糖10g，吐溫801ml，K₂HPO₄?2g/L，MgSO₄×7H₂O?0.2g/L，MnSO₄x?H₂O?0.05g/L，NaCl?5g，鹽溶液4ml，刃天青(25mg/100ml)4ml，蒸餾水950ml，培養基煮至沸騰，添加半胱氨酸，調pH至6.8后，在CO₂下冷卻。鹽溶液：CaCl₂×2H₂O?0.25g/L，KH₂PO₄?1g/L，K₂HPO₄?1g/L，MgSO₄×7H₂O?0.5g/L，NaHCO₃?10g/L，NaCl?2g/L

2.益生菌群的制備過程

2.1凍干菌粉末的活化

分別量取0.9％的生理鹽水10ml于5只試管內，經121℃滅菌20分鐘冷卻至30℃，將5株乳酸菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0.9％的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30℃恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。

2.2益生菌擴大培養

2.2.1母發酵劑的制備