[發(fā)明專利]胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗及其制備方法與應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010193091.7
• 申請日: 2010-06-07
• 公開（公告）號: CN101856496A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏于全;陳縣城;周莉娜;楊莉
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;C12N5/0735;A61P35/00
• 代理公司: 成都科海專利事務(wù)有限責(zé)任公司 51202
• 代理人: 岳英

技術(shù)領(lǐng)域??本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)，特別是一種用胎盤干細(xì)胞制作的抗腫瘤疫苗以及該疫苗的制備方法與應(yīng)用

背景技術(shù)??無論是在發(fā)展中國家還是發(fā)達(dá)國家，惡性腫瘤依然是一類常見的疾病，其發(fā)病率與死亡率居高不下，甚至有增無減，仍然是威脅人類生存的頭號殺手，嚴(yán)重干擾患者的健康和影響生存質(zhì)量。目前治療腫瘤的技術(shù)方法有化療、放療、手術(shù)與生物治療四大模式。化療對患者有著嚴(yán)重的毒副作用，例如骨髓抑制，包括粒細(xì)胞減少等；臟器損傷，包括腎臟，肝臟等的嚴(yán)重毒副作用；消化道反應(yīng)，包括食欲減退、惡心、嘔吐等；此外還包括脫發(fā)、局部組織壞死、靜脈炎等。放療的毒副作用主要表現(xiàn)在皮膚、粘膜放射性潰瘍及縻爛；對眼睛、骨骼、肺等也存在嚴(yán)重副作用。腫瘤的手術(shù)治療也存在許多不足，包括創(chuàng)面大、易伴發(fā)感染、出血等嚴(yán)重副作用。腫瘤的生物治療目前比較熱門的包括細(xì)胞因子治療、基因治療、免疫治療等。腫瘤細(xì)胞因子治療的缺點(diǎn)主要是制備過程繁瑣，細(xì)胞本身具有毒副作用。基因治療的主要缺點(diǎn)包括基因載體構(gòu)建困難、載體的毒副作用，以及基因轉(zhuǎn)染效率低等。目前對腫瘤疫苗的研究，主要包括樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗，但該疫苗制作過程繁瑣、且在大多數(shù)腫瘤中，沒有可被樹突狀細(xì)胞呈遞的供T細(xì)胞識別的抗原決定簇。這些局限性導(dǎo)致其應(yīng)用很有限，且預(yù)防腫瘤形成的效果不明顯。因此，尋求效果更佳的策略和方案一直是惡性腫瘤預(yù)防與治療學(xué)研究的重要課題。

發(fā)明內(nèi)容??本發(fā)明正是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，而提供一種在腫瘤建立之前可以起到疫苗防御作用的，使機(jī)體對腫瘤干細(xì)胞產(chǎn)生特異性免疫抗體與致敏淋巴細(xì)胞，抑制腫瘤干細(xì)胞生長與遷徙，從而達(dá)到阻斷體內(nèi)腫瘤形成與轉(zhuǎn)移的細(xì)胞生物制劑：胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗及其制備方法與應(yīng)用。

越來越多證據(jù)表明腫瘤干細(xì)胞(cancer?stem?cells，CSCs)是腫瘤形成的起始細(xì)胞與腫瘤轉(zhuǎn)移的先鋒細(xì)胞，同時也為腫瘤復(fù)發(fā)的根源。由于腫瘤干細(xì)胞免疫原性低下，對機(jī)體免疫系統(tǒng)持續(xù)刺激易于誘導(dǎo)免疫耐受，從而有利于腫瘤產(chǎn)生與轉(zhuǎn)移形成，刺激機(jī)體打破對腫瘤干細(xì)胞的免疫耐受，產(chǎn)生特異免疫抗體與致敏淋巴細(xì)胞，抑制腫瘤干細(xì)胞增生，可能成為將來防治腫瘤的有效新途徑。近期研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal?stem?cells，MSCs)與腫瘤干細(xì)胞之間有許多類似的生物學(xué)特征包括免疫原性與反應(yīng)原性，二者之間可能具有交叉免疫性。間充質(zhì)干細(xì)胞可通過免疫原性的提高，從而打破免疫系統(tǒng)對腫瘤干細(xì)胞的免疫耐受。人胎盤衍生的干細(xì)胞(human?placenta-derivedstem?cells，hPDSCs)更是近幾年備受關(guān)注的研究領(lǐng)域，hPDSCs來源于孕產(chǎn)婦生產(chǎn)過程中的胎盤，屬于人體遺棄組織，取材方便、來源充足，沒有倫理及法律方面的制約；先期研究結(jié)果表明hPDSCs具有間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)性狀。人胎盤干細(xì)胞有著和其他來源的間充質(zhì)干細(xì)胞相似的生物學(xué)特征，具有大規(guī)模培養(yǎng)的可能，可以為腫瘤生物學(xué)防治提供潛在的理想方法。hPDSCs在形態(tài)上與骨髓MSC類似，光學(xué)顯微鏡下胎盤干細(xì)胞呈長梭形，為典型的成纖維細(xì)胞樣，排列規(guī)則，經(jīng)2周后逐漸形成扁平單層細(xì)胞，并呈漩渦狀或成簇生長(參見說明書附圖1)，隨著細(xì)胞密度的增加，胞體變得細(xì)長，形態(tài)類似成纖維細(xì)胞。

本發(fā)明的任務(wù)是這樣實(shí)現(xiàn)的：胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗，是在1ml的小凍存管中保存有培養(yǎng)8代后的胎盤干細(xì)胞，每只小凍存管含胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗和人AB血清，總體積為200μl，其中胎盤干細(xì)胞數(shù)量為5×10⁵個，置于-80℃冰箱保存待用。

上述胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗的制備方法，其操作是在無菌條件下進(jìn)行，分為四個步驟：(1)處理胎盤組織，(2)胎盤干細(xì)胞的獲取，(3)胎盤干細(xì)胞的培養(yǎng)并傳代8次，(4)制作胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗。

胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗的應(yīng)用是生產(chǎn)直接用于抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，預(yù)防和治療腫瘤的疫苗。本發(fā)明的胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗的使用選擇在腫瘤發(fā)生之前，即在動物模型上，我們先定期對動物接種疫苗，注射部位選擇背側(cè)部右后方皮下，為了避免短期重復(fù)免疫而使機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受，第一次與第二次接種疫苗的時間間隔為1～2周，第二次與第三次疫苗接種間隔為1周，一共接種疫苗3次，以加強(qiáng)小鼠對干細(xì)胞的免疫功能，第三次接種后間隔1周接種腫瘤細(xì)胞。

附圖說明??以下是本發(fā)明說明書附圖的圖面說明：

圖1是本發(fā)明分離的人胎盤干細(xì)胞(hPDSCs)的形態(tài)。

圖2是本發(fā)明抗成瘤比較-肺癌模型，實(shí)驗組應(yīng)用胎盤干細(xì)胞抗腫瘤疫苗，腫瘤體積明顯小于對照組，甚至不形成腫瘤。