[發明專利]胎盤干細胞抗腫瘤疫苗及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201010193091.7
• 申請日: 2010-06-07
• 公開（公告）號: CN101856496A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 魏于全;陳縣城;周莉娜;楊莉
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;C12N5/0735;A61P35/00
• 代理公司: 成都科海專利事務有限責任公司 51202
• 代理人: 岳英

1.一種胎盤干細胞抗腫瘤疫苗，其特征在于：在1ml的小凍存管中保存有培養8代后的胎盤干細胞，每只小凍存管含胎盤干細胞抗腫瘤疫苗和人AB血清，總體積為200μl，其中胎盤干細胞數量為5×10⁵個，置于-80℃冰箱保存待用。

2.根據權利要求1所述的胎盤干細胞抗腫瘤疫苗的制備方法，下面操作是在無菌條件下進行，其特征在于：

(1)處理胎盤組織：取足月生產的胎盤組織，將胎盤組織剪碎成1cm×1cm×1cm大小，用總體積2L的D-Hank’s平衡鹽溶液，沖洗3次，直接用濾網過濾后收集胎盤組織，

(2)胎盤干細胞的獲取：取上述收集到的胎盤組織用0.25％胰蛋白酶10ml?37℃消化5min，終止消化后，200目濾網過濾，收集單細胞，

(3)胎盤干細胞的培養：將上述單細胞用D-Hank’s平衡鹽溶液35ml洗一遍，加入配好的含5％人AB血清的DMEM培養基，調整培養細胞濃度為4×10⁵個/ml，接種于75cm²的培養瓶內，置于37℃，5％CO₂，飽和濕度95％的培養箱培養，每3～4天進行換液，即將培養瓶中培養基倒出，換為新鮮配制的培養基，當胎盤干細胞生長至培養瓶壁70％～80％，單層，即吸盡培養基，加入2～3ml的0.25％胰酶，消化3～5min，在倒置顯微鏡下觀察，當90％的細胞漂浮變圓時，加入大于2倍于胰酶體積的培養基終止消化，并用彎管吹打混勻，轉移到15ml離心管中，離心1500rpm，3min，棄上清，加少許培養基混勻，分裝入2～4個裝有約10ml培養基的75cm²培養瓶中，擴大培養，3～4天傳代1次，直至傳代8次，

(4)制作胎盤干細胞抗腫瘤疫苗：當傳代8次后的胎盤干細胞生長至培養瓶壁70％～80％，單層，即按上述步驟消化細胞，離心，棄上清后，加入人AB血清，將細胞吹散混勻，并將細胞濃度調至2.5×10⁶/ml，按照200μl，即5×10⁵個胎盤干細胞，分裝于1ml小凍存管中，然后置于-80℃冰箱中保存待用。

3.根據權利要求1所述的胎盤干細胞抗腫瘤疫苗的應用，其特征在于：生產直接用于抑制腫瘤的發生、發展和轉移，預防和治療腫瘤的疫苗的應用。