[發明專利]一種堿性磷酸酶結合物的合成工藝

無效

• 申請號: 201010192646.6
• 申請日: 2010-06-04
• 公開（公告）號: CN102269761A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 錢純亙;李可;張裕平
• 申請（專利權）人: 深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 付磊;林毅斌

1.一種合成堿性磷酸酶結合物的方法，所述方法包括：

a)用碳二亞胺和任選的羥基琥珀酰亞胺活化堿性磷酸酶分子的羧基，生成活性堿性磷酸酶酯；

b)加入待結合物，使得堿性磷酸酶酯與待結合物的合成反應，生成堿性磷酸酶結合物。

2.權利要求1的方法，其中步驟a)在酸性條件下進行，優選所述酸性條件為pH?4.0-5.0。

3.權利要求1或2的方法，其中所述碳二亞胺選自二環己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)和N，N′-二異丙基碳二亞胺(DIC)；獨立地所述羥基琥珀酰亞胺選自N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和N-磺酸化羥基琥珀酰亞胺。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其中步驟b)還包括調節體系至堿性，優選所述堿性條件為pH?7.5-9.0。

5.權利要求1-4中任一項的方法，其中所述方法在步驟b)之后還包括純化處理；優選所述純化處理選自超濾純化、脫鹽柱純化、透析純化、凝膠過濾純化、Protein?A或G親和柱純化和硫酸銨沉淀純化。

6.一種根據權利要求1-5中任一項的方法獲得的堿性磷酸酶結合物。

7.一種用于堿性磷酸酶標記的試劑盒，包括碳二亞胺和任選的羥基琥珀酰亞胺。

8.權利要求7的試劑盒，所述試劑盒還包括pH調節劑，所述pH調節劑包括用于步驟a)的pH調節劑、用于步驟b)的pH調節劑或兩者。

9.權利要求8的試劑盒，其中用于步驟a)的所述pH調節劑為酸或緩沖系統，優選所述酸選自脂肪族有機酸、芳香族有機酸和無機酸，所述緩沖系統選自2-(N-嗎啉代)乙磺酸(MES)緩沖系統、哌嗪-N，N’雙(2-乙磺酸)(PIPES)緩沖系統和磷酸鹽緩沖系統。

10.權利要求8或9的試劑盒，其中用于步驟b)的所述pH調節劑為堿，優選選自氫氧化鈉和氫氧化鉀。

11.權利要求7-10中任一項的試劑盒，所述試劑盒還包括指示操作者進行操作的說明、離心超濾管或兩者。