[發明專利]植物營養成分含量的快速提取檢測法

有效

• 申請號: 201010191832.8
• 申請日: 2010-06-01
• 公開（公告）號: CN101865888A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 王紹東;馮曉;王曉云;李文濱;喜多村啟介;朱秀清;李遠明;富校軼;劉偉;姜妍;王浩;劉燕;李宏偉;張平;姚磊
• 申請（專利權）人: 黑龍江省大豆技術開發研究中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/36
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一種植物營養成分含量的快速提取檢測法，包括如下步驟：

水溶性物質異黃酮和脂溶性物質維生素E、葉黃素等類胡蘿卜素物質的一次取樣同時提取，制備樣品；

HPLC兩步分析法。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其中所述的提取是用低溫冷藏條件下的正己烷試劑將欲檢測的植物種子微量樣品中的維生素E、葉黃素等類胡蘿卜素物質溶出后，剩余物再用乙醇試劑溶出異黃酮。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其中所述低溫是0-4℃；所述正己烷是化學純試劑，其用量為250-500μl；所述植物種子是雜交大豆，所述微量樣品是5-10mg，優選種子碎末；所述乙醇是70-80％乙醇，其用量為250-500μl。

4.根據權利要求2所述的檢測方法，其中所述正己烷試劑中含有0.25μg/ml的β-阿樸胡蘿卜素醛和3μg/ml母育酚作為內部標準物。

5.根據權利要求2所述的檢測方法，其中所述提取是將欲檢測的種子逐粒用裁紙刀片，在種臍的正相反側的子葉部位切取碎末加入離心管，同時加入含有β-阿樸胡蘿卜素醛和母育酚內部標準的所述正己烷試劑，振蕩器振蕩10-20秒后，4℃下超聲波超聲8-10分鐘，之后遮光冷藏靜置15-30分鐘后，離心10分鐘，取上清液300-400μl得到維生素E、葉黃素等類胡蘿卜素HPLC分析樣品；再取沉淀加入70-80％的乙醇試劑，振蕩器振蕩10-20秒，超聲波超聲8-10分鐘，之后室溫靜置15-30分鐘后，離心10分鐘，取上清液300-400μl得到異黃酮HPLC分析樣品。

6.根據權利要求1所述的檢測方法，其中所述HPLC兩步分析法包括維生素E及葉黃素等類胡蘿卜素的HPLC檢測和異黃酮的HPLC檢測。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，所述維生素E及葉黃素等類胡蘿卜素的HPLC檢測條件為：使用ODS-3逆向柱，柱溫為40℃，UV檢測器波長在200-900nm之間可用，進樣量為25-30μl，移動相A為75％的甲醇溶液，移動相B為乙酸乙酯，移動相A與移動相B的體積比為50-60∶50-40；采用線性梯度法檢測，流速設定為0.8ml/min；

優選的檢測維生素E用UV波長為292-295nm，檢測葉黃素用UV波長為445-450nm，檢測葉綠素及β-胡蘿卜素用430nm波長，所述移動相所用試劑均為液相色譜專用，并用超聲波脫氣。

8.根據權利要求6所述的檢測方法，所述異黃酮的HPLC檢測條件為：使用ODS-3逆向柱，柱溫：40℃，UV檢測器波長在200-400nm可用，進樣量5μl，移動相A為乙腈(內添加終濃度為0.1％的乙酸)，移動相B為脫離子水(內添加終濃度為0.1％的乙酸)，移動相A與移動相B的體積比為20-50∶80-50；采用線性梯度法檢測，流速0.8ml/min；

優選的檢測異黃酮用UV波長為254nm，所述移動相所用試劑和水均為液相色譜專用，并用超聲波脫氣。

9.權利要求1-8所述的檢測方法的應用，用于大豆多基因聚合育種雜交后代的功能性營養成分的快速檢測和雜交后代的篩選。